本文關鍵詞：毛竹全長均一化cDNA文庫構建與快速生長相關基因的篩選，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：毛竹是我國森林資源中分布最廣、面積最大、用途最多的竹種,在竹業(yè)生產(chǎn)中占有十分重要的地位,具有極高的經(jīng)濟價值、生態(tài)價值和文化價值,毛竹的生長速度非常快,在天然狀態(tài)下,從幼竹出土長至20米的幼竹稈形僅需45-60天,其生長高峰期時一晝夜生長高度可達1米以上,這么快的生長速度很難在其他非竹類植物群中見到。前人利用顯微技術、高通量測序及蛋白組學研究方法已獲得部分毛竹快速生長相關結(jié)構、激素水平、特異基因信息。但毛竹遺傳轉(zhuǎn)化體系尚未系統(tǒng)建立,毛竹優(yōu)勢基因功能亟待系統(tǒng)發(fā)掘與研究。日本理化研究所Minami Matsui博士在2009年構建水稻全長cDNA文庫并將水稻基因大規(guī)模在擬南芥中過表達以研究水稻基因功能,并命名其為FOX(Full-length Overexpress)過表達體系。此外,我國重要林木物種如馬尾松、杉木等生長緩慢、周期長,如何縮短林木生產(chǎn)周期、提升生長速度一直是我國林業(yè)生產(chǎn)的重要目標。因此,篩選與開發(fā)通用快速生長毛竹基因具有重要意義。因此,本項目借助最新的In-fusion技術及均一化關鍵酶DSN (Duplex specific nuclease),自主研發(fā)并初步建立了毛竹全長均一化cDNA文庫,通過水平基因轉(zhuǎn)移技術將其在雙子葉植物擬南芥中大規(guī)模隨機過表達,以期篩選單雙子葉植物通用的快速生長基因。利用毛竹基因過表達的擬南芥株系篩選出葉形特異(40株)、莖稈特異(10株)、矮小(23株)、早花(12株)、晚花(25株)與快速生長(10株)等多類表型。并比對與獲取36個與擬南芥表型相關的毛竹基因,進一步篩選單拷貝插入的純合突變體,以期篩選單雙子葉通用快速生長基因,探討植物快速生長分子機制,為后續(xù)林業(yè)生長應用提供理論基礎與資源積累。
【關鍵詞】：毛竹 均-化-cDNA文庫 過表達 擬南芥 快速生長 表型
【學位授予單位】：福建農(nóng)林大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：S795.7
【目錄】：

• 摘要9-10
• Abstract10-12
• 第一章 緒論12-20
• 1.1 引言12-13
• 1.1.1 研究背景12-13
• 1.1.2 研究目的和意義13
• 1.1.3 研究內(nèi)容13
• 1.2 國內(nèi)外研究現(xiàn)狀與綜述13-17
• 1.2.1 毛竹的形態(tài)結(jié)構學研究進展13-14
• 1.2.2 毛竹莖稈發(fā)育研究進展14-15
• 1.2.3 毛竹快速生長機理研究進展15-16
• 1.2.4 采用文庫篩選基因的研究現(xiàn)狀16-17
• 1.3 研究目標和主要內(nèi)容17-18
• 1.3.1 研究目標17
• 1.3.2 主要研究方法17-18
• 1.4 工作軟硬件基礎18-19
• 1.5 技術路線19-20
• 第二章 毛竹全長均一化cDNA文庫的構建20-35
• 2.1 實驗材料20-22
• 2.1.1 取樣地概括20-21
• 2.1.2 樣本采集21
• 2.1.3 培養(yǎng)基配制21
• 2.1.4 載體擴繁21-22
• 2.2 實驗方法22-29
• 2.2.1 總RNA提取22-23
• 2.2.2 逆轉(zhuǎn)錄反應23
• 2.2.3 全長cDNA第二鏈合成23-24
• 2.2.4 全長cDNA均一化處理24-25
• 2.2.5 均一化cDNA的擴增與膠回收25-26
• 2.2.6 全長均一化cDNA擴增產(chǎn)物與表達載體的連接26-27
• 2.2.7 連接產(chǎn)物純化27-28
• 2.2.8 連接產(chǎn)物電擊轉(zhuǎn)化與涂平板28
• 2.2.9 挑取單克隆驗證插入片段大小28
• 2.2.10 刮板與提取質(zhì)粒28-29
• 2.3 結(jié)果與分析29-33
• 2.3.1 總RNA提取29
• 2.3.2 雙鏈cDNA合成29-31
• 2.3.3 DNA均一化處理結(jié)果比較31
• 2.3.4 In-fusion反應31
• 2.3.5 電轉(zhuǎn)化結(jié)果比較31-32
• 2.3.6 文庫單克隆驗證32-33
• 2.4 討論33-35
• 2.4.1 RNA質(zhì)量是文庫構建成敗的前提條件33-34
• 2.4.2 DSN處理過程需要謹慎34
• 2.4.3 In-fusion效率受PCR產(chǎn)物大小的影響34
• 2.4.4 In-fusion產(chǎn)物的純化有利于電擊轉(zhuǎn)化34-35
• 第三章 毛竹均一化cDNA文庫的擬南芥轉(zhuǎn)化35-42
• 3.1 實驗材料36-37
• 3.1.1 農(nóng)桿菌電擊感受態(tài)的制備36
• 3.1.2 擬南芥的種植36-37
• 3.2 實驗方法37-38
• 3.2.1 農(nóng)桿菌的電擊轉(zhuǎn)化37
• 3.2.2 農(nóng)桿菌侵染擬南芥37-38
• 3.2.3 擬南芥的管理38
• 3.3 結(jié)果與討論38-42
• 3.3.1 農(nóng)桿菌的培養(yǎng)38-39
• 3.3.2 擬南芥的種植與轉(zhuǎn)化39
• 3.3.3 討論39-42
• 第四章 T1代種子的陽性篩選42-46
• 4.1 實驗材料43
• 4.2 方法43
• 4.2.1 種子“層積”處理43
• 4.2.2 陽性苗的抗Basta篩選43
• 4.3 結(jié)果分析43-46
• 4.3.1 結(jié)果43-44
• 4.3.2 分析44-46
• 第五章 T1代轉(zhuǎn)基因擬南芥表型的鑒定46-60
• 5.1 實驗材料46
• 5.2 實驗方法46-58
• 5.2.1 表型觀察46-47
• 5.2.2 快速生長相關表型分類47-54
• 5.2.3 毛竹插入基因的鑒定54-58
• 5.3 結(jié)果與分析58-60
• 第六章 純合子鑒定60-63
• 6.1 T2代種子的basta篩選60-62
• 6.1.1 1/2 MS培養(yǎng)基篩選60
• 6.1.2 移苗培養(yǎng)60-62
• 6.2 T3代種子培養(yǎng)基篩選62-63
• 6.2.1 T3代種子basta篩選62
• 6.2.2 移苗培養(yǎng)62-63
• 第七章 結(jié)論與展望63-65
• 7.1 結(jié)果與討論63-64
• 7.2 展望64-65
• 參考文獻65-71
• 附錄71-85
• 致謝85

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中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 王濤濤;毛竹全長均一化cDNA文庫構建與快速生長相關基因的篩選[D];福建農(nóng)林大學;2016年

  本文關鍵詞：毛竹全長均一化cDNA文庫構建與快速生長相關基因的篩選，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：458711