本文關(guān)鍵詞：豬圓環(huán)病毒2型ORF2基因與豬瘟病毒E2基因在奶山羊胎兒成纖維細(xì)胞中的表達(dá)與生物活性的鑒定，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：動(dòng)物乳腺生物反應(yīng)器技術(shù)就是利用乳腺特異性表達(dá)載體,將我們所需要的目的蛋白通過動(dòng)物的乳汁表達(dá)出來。通過動(dòng)物乳腺所生產(chǎn)的蛋白經(jīng)過了動(dòng)物乳腺的一系列修飾過后,不僅生物安全性高,且生產(chǎn)量也有了很大的提升,因此可將我們所需要的蛋白進(jìn)行批量化生產(chǎn)。豬圓環(huán)病毒,是目前已知的最小的動(dòng)物病毒之一,可與多種真菌或病毒混合感染,從而引起豬的腎病綜合征、皮炎、母豬繁育障礙等疾病。豬圓環(huán)病毒屬于圓環(huán)病毒科,分為PCV-1與PCV-2兩種血清類型,其中PCV-2為致病性血清。PCV-2基因組全長為1.76 kb,包含11個(gè)ORF開放閱讀框,ORF2在其分子機(jī)制中發(fā)揮了很重要的作用,因其主要編碼PCV-2的Cap蛋白。Cap蛋白為豬圓環(huán)病毒的主要免疫原性物質(zhì),因此主要對PCV-2的第二個(gè)閱讀框的進(jìn)行研究�，F(xiàn)已有實(shí)驗(yàn)證明其可以誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生保護(hù)性的抗體,在豬圓環(huán)病毒的防控與治療中起著重要的作用。豬瘟病毒被動(dòng)物國際衛(wèi)生組織列為A類的傳染性疾病,致死率非常高,約為80%至90%,對養(yǎng)豬的影響非常巨大,并且造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。豬瘟病毒的基因序列全長約為12.3Kbp,是單股正鏈的RNA病毒,屬于黃病毒科瘟病毒屬。豬瘟疾病主要是由豬瘟病毒所引起,其中E2基因所編碼的囊膜糖蛋白能與抗原決定簇進(jìn)行中和反應(yīng),并且為豬瘟病毒的主要保護(hù)性抗原,能促使機(jī)體產(chǎn)生抵抗病毒的攻擊。因此E2囊膜蛋白一直被用于豬瘟病毒的防治過程中的主要研究,也成為近幾年來新型疫苗的與抗原檢測的主要靶基因。為獲得穩(wěn)定表達(dá)豬圓環(huán)病毒2型(PCV-2)ORF2基因與CSFV-E2基因的奶山羊胎兒成纖維細(xì)胞,本研究分別將PCV-2-ORF2基因與CSFV-E2基因分別與篩選基因NEO表達(dá)框串聯(lián)插入p BC1質(zhì)粒,得到重組真核表達(dá)載體p BC1-ORF2-NEO與p BC1-E2-NEO。并采用脂質(zhì)體介導(dǎo)法轉(zhuǎn)染至奶山羊胎兒成纖維細(xì)胞(g FFs)中,經(jīng)G418篩選獲得具有穩(wěn)定抗性的g FFs細(xì)胞株。經(jīng)RT-PCR分析顯示,在獲得的g FFs細(xì)胞株中能夠擴(kuò)增689bp的ORF2基因與1131bp的E2基因和1953bp的NEO表達(dá)框,與預(yù)期的結(jié)果相符。Western-blot分析顯示,獲得了約36ku與42ku的表達(dá)產(chǎn)物,且能夠與兔抗PCV-2 Cap與兔抗CSFV-E2囊膜蛋白抗體發(fā)生反應(yīng)。結(jié)果表明,ORF2基因與E2基因成功整合到山羊胎兒成纖維細(xì)胞染色體上并得到正確表達(dá),表達(dá)產(chǎn)物具有良好的反應(yīng)原性,這為構(gòu)建分泌Cap蛋白與E2囊膜蛋白的奶山羊乳腺生物反應(yīng)器奠定了理論和物質(zhì)基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：豬圓環(huán)病毒 豬瘟病毒 乳腺表達(dá)載體 奶山羊 胎兒成纖維細(xì)胞 轉(zhuǎn)染
【學(xué)位授予單位】：甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S852.65
【目錄】：

• 摘要3-5
• SUMMARY5-9
• 縮略詞對照表9-11
• 第一章 文獻(xiàn)綜述11-23
• 1 引言11-12
• 2 乳腺生物反應(yīng)器12-16
• 2.1 乳腺生物反應(yīng)器技術(shù)12-13
• 2.2 乳腺生物反應(yīng)器的發(fā)展歷程13
• 2.3 乳腺生物反應(yīng)器的優(yōu)點(diǎn)13-14
• 2.4 影響外源蛋白高表達(dá)的因素14
• 2.5 基因打靶載體在乳腺表達(dá)載體中的應(yīng)用14
• 2.6 乳腺特異表達(dá)載體的主要結(jié)構(gòu)組成14-15
• 2.7 β-乳球蛋白基因在乳腺特異載體中的應(yīng)用15
• 2.8 乳腺生物反應(yīng)器的發(fā)展中存在的問題15
• 2.9 乳腺生物反應(yīng)器的發(fā)展前景15-16
• 3 豬圓環(huán)病毒PCV2的研究16-19
• 3.1 豬圓環(huán)病毒的相關(guān)病原學(xué)16
• 3.2 豬圓環(huán)病毒在世界范圍內(nèi)的流行狀況16
• 3.3 豬圓環(huán)病毒的檢測方法16-17
• 3.4 豬圓環(huán)病毒的診斷標(biāo)準(zhǔn)17
• 3.5 實(shí)驗(yàn)室診斷豬圓環(huán)病毒的方法17
• 3.6 豬圓環(huán)病毒的主要結(jié)構(gòu)17-18
• 3.7 Cap蛋白的作用機(jī)制18
• 3.8 ORF2基因的作用機(jī)制18
• 3.9 豬圓環(huán)病毒疫苗的國內(nèi)及國外研究進(jìn)展18-19
• 4 豬瘟病毒CSFV的研究19-22
• 4.1 豬瘟病毒的相關(guān)病原學(xué)19
• 4.2 豬瘟病毒的流行現(xiàn)狀19
• 4.3 豬瘟病毒的檢測方法19-20
• 4.4 豬瘟病毒所編碼的蛋白20
• 4.5 豬瘟病毒E2囊膜蛋白的作用機(jī)制20-21
• 4.6 豬瘟病毒疫苗的發(fā)展歷程21
• 4.7 我國豬瘟病毒的預(yù)防與治療21
• 4.8 我國豬瘟病毒研究中存在的問題21-22
• 5.本研究的目的及主要內(nèi)容22-23
• 第二章 豬圓環(huán)病毒ORF2基因與豬瘟病毒E2基因的PBC1乳腺特異表達(dá)載體的構(gòu)建。23-35
• 1 材料與方法23-30
• 1.1 材料23-24
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法24-30
• 2 結(jié)果30-35
• 2.1 目的基因PCV2-ORF2與CSFV-E2的擴(kuò)增30-32
• 2.2 重組載體p BC1-ORF2與p BC1-E2載體的酶切鑒定32-33
• 2.3 重組載體p BC1-ORF2-NEO與p BC1-E2-NEO載體的酶切鑒定33-35
• 3 討論35
• 第三章 乳腺特異表達(dá)載體PBC1-ORF2-NEO與PBC1-E2-NEO在奶山羊胎兒成纖維細(xì)胞中的表達(dá)與生物活性的鑒定35-51
• 1 材料與方法36-43
• 1.1 材料36-37
• 1.2 方法37-43
• 2 結(jié)果43-48
• 2.1 重組質(zhì)粒p BC1-ORF2-NEO轉(zhuǎn)染奶山羊胎兒成纖維細(xì)胞的觀察43-44
• 2.2 重組質(zhì)粒p BC1- E2-NEO轉(zhuǎn)染奶山羊胎兒成纖維細(xì)胞的觀察44
• 2.3 RT-PCR檢測重組質(zhì)粒p BC1-ORF2-NEO在奶山羊胎兒成纖維細(xì)胞中的表達(dá)44-45
• 2.4 RT-PCR檢測重組質(zhì)粒p BC1-E2-NEO在奶山羊胎兒成纖維細(xì)胞中的表達(dá)45-46
• 2.5 Western blot檢測CAP蛋白與E2囊膜蛋白的表達(dá)46-48
• 3 討論48-51
• 結(jié)論51-52
• 參考文獻(xiàn)52-58
• 致謝58-60
• 導(dǎo)師簡介60-61
• 作者簡介61-62

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1 龔振華,尹燕博,沈廣;豬圓環(huán)病毒:一種新發(fā)現(xiàn)的病原[J];中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào);2000年S1期

2 王麗榮;;豬圓環(huán)病毒的病原學(xué)與診斷[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2006年06期

3 孫艷明;趙德明;;豬圓環(huán)病毒分子生物學(xué)研究進(jìn)展[J];中國畜牧獸醫(yī);2006年07期

4 IGORMOROZOV,李凱年;豬圓環(huán)病毒及臨床意義[J];國外畜牧科技;1999年05期

5 馮衛(wèi);陳沫;楊曉容;聶克艷;陳靜;姜萍;楊林;劉海;顏艷;王海;;基于文獻(xiàn)計(jì)量法分析我國豬圓環(huán)病毒的研究現(xiàn)狀[J];農(nóng)技服務(wù);2013年12期

6 王志軍;郭慧娟;李秀麗;董樹仁;鄢明華;;豬圓環(huán)病毒病原學(xué)研究進(jìn)展[J];天津農(nóng)業(yè)科學(xué);2014年08期

7 ;獸藥新產(chǎn)品——豬圓環(huán)病毒疫苗[J];科技致富向?qū)?2010年28期

8 段麗麗,文心田,曹三杰,馬曉平;豬圓環(huán)病毒分子生物學(xué)研究進(jìn)展[J];動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2005年06期

9 丁昌春;鄭新勇;楊世興;;豬圓環(huán)病毒研究進(jìn)展[J];中國動(dòng)物檢疫;2006年08期

10 王慧杰;喬宏興;;豬圓環(huán)病毒河南株的分離鑒定[J];中國農(nóng)學(xué)通報(bào);2007年09期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 王東方;安春霞;劉光輝;閆若潛;吳志明;;豬圓環(huán)病毒1、2型多重PCR診斷方法建立及應(yīng)用[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會家畜傳染病學(xué)分會第七屆全國會員代表大會暨第十三次學(xué)術(shù)研討會論文集（上冊）[C];2009年

2 馮麗麗;張改平;張麗萍;朱禮倩;李嬌;楊蘇珍;席俊;;豬圓環(huán)病毒致病機(jī)理的研究進(jìn)展[A];河南省畜牧獸醫(yī)學(xué)會第七屆理事會第二次會議暨2008年學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2008年

3 黃立平;劉長明;危艷武;陸月華;郭龍軍;溫士剛;武嘉男;吳洪麗;;檢測豬圓環(huán)病毒2型血清中和抗體阻斷ELISA方法的建立及應(yīng)用[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會家畜傳染病學(xué)分會第七屆全國會員代表大會暨第十三次學(xué)術(shù)研討會論文集（上冊）[C];2009年

4 程榮華;劉云志;孫健;呼延含蓉;趙欣;邵洪澤;張麗媛;楊金生;;淺談豬圓環(huán)病毒研究現(xiàn)況[A];低碳經(jīng)濟(jì)與科學(xué)發(fā)展——吉林省第六屆科學(xué)技術(shù)學(xué)術(shù)年會論文集[C];2010年

5 王鑫;葉賀佳;李敏;仇微紅;孫招金;梁昭平;;豬圓環(huán)病毒研究進(jìn)展[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會生物制品學(xué)分會中國微生物學(xué)會獸醫(yī)微生物學(xué)專業(yè)委員會2010年學(xué)術(shù)年會（第三屆中國獸藥大會學(xué)術(shù)論壇）論文集[C];2010年

6 郎洪武;趙德明;王力;張廣川;程君生;宋立;;豬圓環(huán)病毒分離、鑒定及豬斷奶多系統(tǒng)衰弱綜合征[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會獸醫(yī)病理學(xué)分會第十一次獸醫(yī)病理學(xué)、第十次動(dòng)物病理生理學(xué)學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2001年

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8 蘆銀華;談國蕾;陳德勝;陳溥言;;豬圓環(huán)病毒、豬繁殖和呼吸綜合征病毒快速檢測方法的研究[A];豬的重要傳染病防治研究新成果——中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會家畜傳染病學(xué)分會第五屆理事會第二次全體會議暨防檢疫專業(yè)委員會第7次學(xué)術(shù)交流會論文集[C];2002年

9 萬遂如;;豬圓環(huán)病毒感染[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會家畜傳染病學(xué)分會成立20周年慶典暨第十次學(xué)術(shù)研討會論文集（上）[C];2003年

10 萬遂如;;豬圓環(huán)病毒感染的防治[A];現(xiàn)代化養(yǎng)豬企業(yè)經(jīng)營管理研討會論文集[C];2004年

中國重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 臨城縣畜牧辦公室 張榮連;豬圓環(huán)病毒與肺炎混感的診治[N];河北科技報(bào);2014年

2 江蘇省農(nóng)科院獸醫(yī)所 俞正玉 林繼煌;豬圓環(huán)病毒感染[N];江蘇農(nóng)業(yè)科技報(bào);2004年

3 李凱年 譯;日本韓國發(fā)現(xiàn)豬圓環(huán)病毒感染[N];中國畜牧水產(chǎn)報(bào);2001年

4 記者 尹江勇;“豬圓環(huán)病毒疫苗”技術(shù)實(shí)現(xiàn)國產(chǎn)化[N];河南日報(bào);2010年

5 張曉鵬　記者 李麗云;國內(nèi)首創(chuàng)“豬圓環(huán)病毒新一代疫苗”研制成功[N];科技日報(bào);2010年

6 記者 孟山　李松戰(zhàn);豬圓環(huán)病毒疫苗在洛研制成功[N];洛陽日報(bào);2010年

7 記者 喬地　通訊員 聞亞麗;“豬圓環(huán)病毒”疫苗批準(zhǔn)上市[N];科技日報(bào);2010年

8 邢臺市獸醫(yī)院 邢蘭君 楊立帆;豬圓環(huán)病毒與附紅細(xì)胞體混感怎么辦[N];河北科技報(bào);2014年

9 張曉鵬;“豬圓環(huán)病毒疫苗”全國推廣[N];農(nóng)民日報(bào);2010年

10 本報(bào)記者 喬地　通訊員 馬焱 鄭世孝;科技創(chuàng)新,走在富民強(qiáng)國的路上[N];科技日報(bào);2010年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 周瑩珊;豬圓環(huán)病毒2型感染誘導(dǎo)PK-15細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激與凋亡的機(jī)制研究[D];浙江大學(xué);2016年

2 時(shí)建立;豬圓環(huán)病毒2型糖基化位點(diǎn)突變對病毒復(fù)制能力和致病性的影響及抗體膠體金檢測方法的建立[D];山東師范大學(xué);2016年

3 蘆銀華;華東地區(qū)豬圓環(huán)病毒2型的分子流行病學(xué)調(diào)查及其感染性核酸的構(gòu)建[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2003年

4 司興奎;豬圓環(huán)病毒2型感染對豬免疫功能影響的細(xì)胞與分子機(jī)制[D];中國農(nóng)業(yè)大學(xué);2005年

5 曲連東;豬圓環(huán)病毒2型地方株的分離鑒定和診斷方法的建立及應(yīng)用[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2006年

6 華利忠;豬圓環(huán)病毒2型誘導(dǎo)仔豬淋巴細(xì)胞凋亡途徑的研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

7 溫立斌;豬圓環(huán)病毒2型的分子流行病學(xué)研究[D];中國農(nóng)業(yè)大學(xué);2005年

8 董林;豬圓環(huán)病毒2型診斷試劑盒的研制與應(yīng)用[D];吉林大學(xué);2014年

9 朱善元;江蘇部分地區(qū)豬圓環(huán)病毒2型的檢測及其免疫接種試驗(yàn)[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2008年

10 潘群興;豬圓環(huán)病毒2型感染分子診斷與防制的相關(guān)研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2008年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 陳冬杰;豬圓環(huán)病毒2型與豬鼻支原體共感染協(xié)同致病性研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2015年

2 王曉卉;豬圓環(huán)病毒2型滅活苗參考品的研制及定值方法研究[D];中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所;2015年

3 高雪洪;閩西地區(qū)豬圓環(huán)病毒2型血清學(xué)調(diào)查及遺傳變異分析[D];福建農(nóng)林大學(xué);2015年

4 王力圓;不同品種豬感染圓環(huán)病毒Ⅱ型后肺組織差異miRNA的鑒定及功能分析[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

5 朱鵬;豬圓環(huán)病毒2型ORF2基因的克隆與表達(dá)及其免疫原性研究[D];安徽農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

6 李麗;豬圓環(huán)病毒2型ORF2基因的表達(dá)及抗體ELISA方法的建立[D];中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所;2011年

7 侯成才;豬圓環(huán)病毒2型Cap蛋白基因在畢赤酵母中的表達(dá)與復(fù)合水佐劑的研制[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

8 陳福旺;豬瘟病毒感染報(bào)告細(xì)胞系和豬圓環(huán)病毒2型敏感細(xì)胞系的建立[D];吉林大學(xué);2016年

9 陳靈艷;豬圓環(huán)病毒衣殼蛋白ORF2的原核表達(dá)系統(tǒng)的研究[D];福州大學(xué);2014年

10 張廣芳;豬圓環(huán)病毒2型ORF3基因的原核表達(dá)與間接ELISA檢測方法的建立及初步應(yīng)用[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2016年

  本文關(guān)鍵詞：豬圓環(huán)病毒2型ORF2基因與豬瘟病毒E2基因在奶山羊胎兒成纖維細(xì)胞中的表達(dá)與生物活性的鑒定，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：455894