發(fā)布時間：2017-06-16 13:14

  本文關(guān)鍵詞：山羊IGFBP-2基因的克隆、序列分析及其組織表達，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：【目的】克隆獲得南江黃羊IGFBP-2(Insulin-like growth factor binding protein-2)基因的CDS區(qū)全序列,對其進行生物信息學分析,并分析IGFBP-2的mRNA和蛋白組織表達特征,為深入研究該基因在出生后山羊生長和發(fā)育過程中的作用以及表達調(diào)控提供基礎資料。【方法】下載NCBI的Gen Bank數(shù)據(jù)庫中公布的綿羊(Ovis aries,NM_001009436)和牛(Bos taurus,NM_174555)的IGFBP-2基因的mRNA序列,經(jīng)序列比對后采用保守區(qū)域序列并利用Primer Premier 6.0軟件設計克隆引物,經(jīng)PCR擴增后采用TA克隆技術(shù)獲取含有陽性克隆子的菌液,送公司測序得到山羊IGFBP-2基因的完整編碼區(qū)序列,并利用Edit Seq、DNAMAN 6.0、MEGA 6.0和Ex PASy在線平臺等軟件對CDS區(qū)序列和其編碼的氨基酸序列進行生物信息學分析;獲得山羊IGFBP-2基因CDS區(qū)序列后,利用該序列設計實時熒光定量PCR(Q-PCR)引物,采用Q-PCR和蛋白質(zhì)免疫印跡雜交(Western blotting)方法檢測了IGFBP-2的mRNA和蛋白在出生后南江黃羊不同組織(心臟、肝臟、肺、背最長肌、半膜肌和臂三頭肌)和不同發(fā)育階段(3、30、60、90和120 d)的表達情況。【結(jié)果】1克隆得到954bp的南江黃羊IGFBP-2基因的CDS區(qū)全序列,堿基組成為GC含量69.39%,AT含量30.61%,共編碼317個氨基酸殘基,預測的山羊IGFBP-2蛋白分子量大小為33.8808 kD,等電點為7.82,二級結(jié)構(gòu)由無規(guī)卷曲(68.14%)、α-螺旋(18.30%)和延伸鏈(13.56%)三種形式組成;蛋白結(jié)構(gòu)域分析發(fā)現(xiàn),IGFBP-2蛋白序列包含保守的IB(IGFBP homologues)和TY(Thyroglobulin typeΙrepeats)結(jié)構(gòu)域,IB結(jié)構(gòu)域位于第37—125位氨基酸處,TY結(jié)構(gòu)域位于第250—302位氨基酸處;2磷酸化位點預測發(fā)現(xiàn),IGFBP-2蛋白中存在Ser(5)和Thr(7)共12個磷酸化位點;糖基化位點預測發(fā)現(xiàn),IGFBP-2蛋白序列中存在10個N-糖基化位點和2個O-糖基化位點;3CDS區(qū)序列相似性比較發(fā)現(xiàn),山羊IGFBP-2與綿羊、牛、豬、人和小鼠的相似性分別達到98.99%、97.73%、87.12%、78.33%和76.26%;氨基酸序列相似性比較發(fā)現(xiàn),山羊IGFBP-2與綿羊、牛、豬、人和小鼠的相似性分別達到99.24%、98.10%、87.07%、70.27%和73.00%;4系統(tǒng)進化樹分析發(fā)現(xiàn),山羊IGFBP-2與綿羊和牛的親緣關(guān)系最近;5組織表達分析表明,IGFBP-2在肝臟中的mRNA和蛋白的相對表達量均最高(P0.01),背最長肌次之;在不同發(fā)育階段的肝臟組織中,IGFBP-2 mRNA和蛋白相對表達量均呈現(xiàn)一直上升的趨勢;在不同發(fā)育階段的背最長肌組織中,IGFBP-2的mRNA表達水平呈現(xiàn)一種"上升-下降-上升"的波動平衡�！窘Y(jié)論】獲得了山羊IGFBP-2基因完整的編碼區(qū)序列和組織表達特征,生物信息學分析發(fā)現(xiàn)IGFBP-2基因的編碼區(qū)序列具有物種間的保守性,肝臟是山羊IGFBP-2的mRNA和蛋白表達的主要組織,同時在山羊不同發(fā)育階段的肝臟和背最長肌組織中,IGFBP-2基因的mRNA和蛋白表達豐度呈現(xiàn)一定的規(guī)律性,表明IGFBP-2基因可能在出生后山羊的早期生長發(fā)育過程中發(fā)揮著重要的作用。
【作者單位】： 四川農(nóng)業(yè)大學畜禽遺傳資源發(fā)掘與創(chuàng)新利用四川省重點實驗室;
【關(guān)鍵詞】： 山羊 IGFBP- 基因克隆 熒光定量PCR 蛋白免疫印跡雜交
【基金】：四川省科技支撐計劃(2014NZ0077,2015NZ0112)
【分類號】：S827
【正文快照】： 0引言【研究意義】南江黃羊作為中國人工培育的第一個肉用山羊品種,具有性成熟早、生長發(fā)育快、繁殖力高、產(chǎn)肉性能好、適應性強、耐粗飼和遺傳性穩(wěn)定的特點。生長性狀作為畜禽重要的經(jīng)濟性狀,其分子機理的研究極其重要。畜禽的生長發(fā)育受到神經(jīng)內(nèi)分泌生長軸的調(diào)控,對于哺乳動

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本文編號：455509