本文關(guān)鍵詞：家蠶膽堿激酶基因的原核表達(dá)與蛋白質(zhì)純化及在農(nóng)藥殘留檢測(cè)中的應(yīng)用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：乙酰膽堿酯酶(Ach E)是有機(jī)磷(OP)和氨基甲酸酯類農(nóng)藥的作用靶蛋白,在體外膽堿激酶(choline kinase)可專一性地以三磷酸腺苷(ATP)作為磷酸的供體,催化Ach E的酶促反應(yīng)產(chǎn)物氯化膽堿發(fā)生磷酸化。依據(jù)家蠶基因組數(shù)據(jù)庫中的膽堿激酶基因(Bmcok)序列(Gen Bank登錄號(hào):AK378994.1)設(shè)計(jì)合成特異引物,從家蠶5齡第3天幼蟲頭部克隆了家蠶膽堿激酶基因,在大腸桿菌中進(jìn)行原核表達(dá)并純化目的蛋白質(zhì),獲得質(zhì)量濃度約1.03 mg/m L的家蠶膽堿激酶液。純化的家蠶膽堿激酶在30℃、p H 9.5時(shí)的活性最高,約為115.6 U/mg。通過耦合Ach E和家蠶膽堿激酶的酶催化反應(yīng),并結(jié)合ATP-熒光素發(fā)光反應(yīng),建立酶抑制-發(fā)光快速檢測(cè)有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留的方法。該方法對(duì)甲胺磷殘留的檢測(cè)限可達(dá)0.05μg/m L,靈敏度高于現(xiàn)有的酶抑制色卡法和酶抑制分光光度計(jì)法,初步表明了將家蠶膽堿激酶應(yīng)用于有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)的可行性。
【作者單位】： 浙江省植物有害生物防控重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室——省部共建國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院蠶桑研究所;
【關(guān)鍵詞】： 家蠶 膽堿激酶 基因克隆 原核表達(dá) 農(nóng)藥殘留 酶抑制法 發(fā)光檢測(cè)
【基金】：國家高技術(shù)研究發(fā)展計(jì)劃“863”項(xiàng)目(No.2011AA100806) 浙江省蠶桑產(chǎn)業(yè)科技創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)專項(xiàng)(No.2011R50028)
【分類號(hào)】：S881.2;S481.8
【正文快照】： 磷酸膽堿是細(xì)胞膜脂質(zhì)雙分子層結(jié)構(gòu)的主要成分,不僅作為膜結(jié)構(gòu)物質(zhì),而且與細(xì)胞膜融合、胞飲作用、膜轉(zhuǎn)運(yùn)作用以及酶催化活性有關(guān),其在真核細(xì)胞中主要通過Kennedy途徑合成[1]。膽堿激酶(choline kinase,COK)是催化Kenndey合成途徑第一步的酶,在一定條件下也是該代謝途徑的調(diào)節(jié)

【相似文獻(xiàn)】

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1 王雷;肺炎鏈球菌膽堿激酶LicA以及磷酸膽堿轉(zhuǎn)移酶LicD2的結(jié)構(gòu)和酶學(xué)研究[D];中國科學(xué)技術(shù)大學(xué);2014年

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1 芮軍;肺癌的膽堿顯像與膽堿代謝的變化[D];山東大學(xué);2010年

  本文關(guān)鍵詞：家蠶膽堿激酶基因的原核表達(dá)與蛋白質(zhì)純化及在農(nóng)藥殘留檢測(cè)中的應(yīng)用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號(hào)：452586