蘋果（Malus domestica Borkh）是人們經(jīng)常食用的水果之一,在世界范圍內(nèi)廣泛種植。但是,蘋果受到干旱及高鹽等逆境的脅迫限制了蘋果的產(chǎn)量及品質(zhì)。研究表明,堿性亮氨酸拉鏈（bZIP）蛋白具有很多重要的生物學(xué)功能,如:信號轉(zhuǎn)導(dǎo),響應(yīng)壓力反應(yīng),促進(jìn)生長和發(fā)育,并且可以提高植物抗非生物脅迫的能力。課題組分析了bZIP轉(zhuǎn)錄因子家族,從蘋果基因組中鑒定得到112個bZIP基因,并結(jié)合基因表達(dá)和進(jìn)化分析,揭示了它們在蘋果的生長發(fā)育及抵御脅迫方面的功能。在此基礎(chǔ)上,本研究從蘋果中克隆bZIP家族基因中的MdbZIP48,轉(zhuǎn)化模式植物擬南芥,開展bZIP基因的功能和作用機制研究,為蘋果的抗性品種選育和遺傳改良從分子水平上提供了依據(jù)。獲得如下研究結(jié)果:1.以富士蘋果cDNA為模板,從中克隆得到MdbZIP48基因的CDS序列,GenBank登錄號為XM₀08367053.2,序列分析發(fā)現(xiàn)該基因開放閱讀框長度為900bp,編碼299個氨基酸,具有典型的bZIP結(jié)構(gòu)域,屬于蘋果bZIP轉(zhuǎn)錄因子的A亞家族。構(gòu)建過表達(dá)載體,在農(nóng)桿菌介導(dǎo)下,轉(zhuǎn)化模式植物擬南芥。2.研究發(fā)現(xiàn),在干旱...

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圖2-1MdbZIP48基因的克隆1：MdbZIP48的cDNA；M：DNAMarkerDL2000Fig.2-1GenecloningofMdbZIP48

圖2-1MdbZIP48基因的克隆1：MdbZIP48的cDNA；M：DNAMarkerDL2000Fig.2-1GenecloningofMdbZIP481:cDNAofMdbZIP48gene;M:DNAMarkerDL2000

圖2-2MdbZIP48-2300載體菌液PCR鑒定M：DNAmarkerDL1000；1，2，3：攜帶MdbZIP48基因的陽性克隆

圖2-2MdbZIP48-2300載體菌液PCR鑒定M：DNAmarkerDL1000；1，2，3：攜帶MdbZIP48基因的陽性克隆Fig.2-2PCRamplifyofrecombinantplasmidofMdbZIP48-2300vecto....

圖2-4MdbZIP48與其他相近物種bZIP氨基酸保守結(jié)構(gòu)域序列比對

圖2-4MdbZIP48與其他相近物種bZIP氨基酸保守結(jié)構(gòu)域序列比對。相關(guān)基因的Genbank登錄號為：AtABF1（NP₅64551.1）,AtABF3（NP₈49490.2）,AtABF4（NP<sub>5</s....

圖2-5重組載體轉(zhuǎn)入GV3101后的菌液PCR檢測M：DNAmarkerDL1000；1，2，3：攜帶MdbZIP48基因的陽性克隆

2.3.2MdbZIP48基因過量表達(dá)載的及轉(zhuǎn)基因擬南芥的重組質(zhì)粒構(gòu)建成功后，轉(zhuǎn)化GV3101，進(jìn)行菌液PCR鑒定（圖2-5）。圖2-5重組載體轉(zhuǎn)入GV3101后的菌液PCR檢測M：DNAmarkerDL1000；1，2，3：攜帶MdbZIP48基因的陽性克....

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