目的:有機(jī)磷類殺蟲劑是農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中一種常見的農(nóng)資。因其價(jià)低易得,效果顯著,在世界范圍內(nèi)的農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中被廣泛的應(yīng)用。從某種意義上講,有機(jī)磷的發(fā)明和使用,對保證世界各國的糧食生產(chǎn)和糧食安全,起到了非常重要的作用。但同時(shí),我們也看到,在和有機(jī)磷相關(guān)的生產(chǎn)、運(yùn)輸和應(yīng)用中,由于意外沾染和不當(dāng)使用而造成的急慢性中毒時(shí)有發(fā)生。在一些以農(nóng)業(yè)為主的不發(fā)達(dá)國家中,與有機(jī)磷相關(guān)的中毒案例甚至占據(jù)了自殺死亡案例的第一位。而且,在海灣戰(zhàn)爭、恐怖主義等事件的相關(guān)報(bào)導(dǎo)中,我們也可以看到諸如沙林、索曼、VX（propylamine ethyl methylthiophosphonate）等有機(jī)磷類神經(jīng)毒劑的描述。有統(tǒng)計(jì),全球每年因有機(jī)磷中毒和死亡的人數(shù)多達(dá)數(shù)百萬。我國是農(nóng)業(yè)大國,有機(jī)磷殺蟲劑的使用仍然非常廣泛。全國范圍內(nèi),每年都有大量的各種原因所致的有機(jī)磷中毒的案例。因此,為了社會(huì)民生和國防安全的需要,有機(jī)磷中毒的解毒研究顯得非常迫切。1953年,研究者發(fā)現(xiàn)人體內(nèi)天然存在一種可以水解對氧磷的磷酸酯酶類,故命名對氧磷酶1（Paraoxonase PON1）。因其還具有在體內(nèi)外對多種有機(jī)磷類化合物進(jìn)行高效、無毒的水解作用,故而...

【文章頁數(shù)】：102 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語
第一部分 :重組人血清對氧磷酶1R/Q192亞型同工酶的表達(dá)和純化
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 主要試劑和儀器
            2.1.1 主要試劑
            2.1.2 主要儀器
            2.1.3 主要溶液配制
        2.2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.2.1 構(gòu)建rhPON1R/Q192基因序列的質(zhì)粒表達(dá)系統(tǒng)
            2.2.2 桿狀病毒的制備
            2.2.3 目標(biāo)蛋白的表達(dá)和鑒定
            2.2.4 目標(biāo)蛋白的純化
            2.2.5 目標(biāo)蛋白的活性檢測
    3 結(jié)果
        3.1 含有hPON1 R/Q192基因亞型核酸序列的質(zhì)粒系統(tǒng)的構(gòu)建
            3.1.1 基因信息
            3.1.2 合成基因的鑒定
            3.1.3 取酶切后的載體質(zhì)粒
            3.1.4 無內(nèi)毒素質(zhì)粒的提取
        3.2 病毒感染IPLB-SF21 細(xì)胞的鏡檢結(jié)果和病毒滴度定量分析
            3.2.1 轉(zhuǎn)染細(xì)胞的OLYMPUS倒置顯微鏡鏡檢結(jié)果
            3.2.2 P2代桿狀病毒滴度檢測
        3.3 目標(biāo)蛋白的檢測
            3.3.1 聚丙烯酰胺凝膠電泳結(jié)果
            3.3.2 目標(biāo)蛋白的Western Blot結(jié)果
            3.3.3 目標(biāo)蛋白的活性檢測
    4 討論
    5 結(jié)論
第二部分 脫糖基化對重組人對氧磷酶1亞型同工酶的影響
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 主要試劑和儀器
            2.1.1 主要試劑
            2.1.2 主要儀器
            2.1.3 主要試劑的配制
        2.2 研究方法
            2.2.1 混合型人血清對氧磷酶(hPON mix)的純化和鑒定
            2.2.2 rhPON1 R/Q192的脫糖基化反應(yīng)
            2.2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3 結(jié)果
        3.1 混合人血清的純化和鑒定
            3.1.1 經(jīng)檢測混合人血清水解對氧磷的活性
            3.1.2 人混合血清的垂直電泳鑒定
        3.2 脫糖基化對于PON1活性和底物特異性的影響
            3.2.1 脫糖基化對于各組PON1活性的影響
            3.2.2 比較脫糖基化對于PON1的底物特異性的影響
        3.3 脫糖基化對于底物分子的影響
    4 討論
    5 結(jié)論
第三部分 重組人對氧磷酶1亞型同工酶對有機(jī)磷中毒大鼠的腦神經(jīng)的保護(hù)作用
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 材料
            2.1.1 主要試劑
            2.1.2 主要儀器
            2.1.3 主要試劑配制
        2.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和分組
        2.3 實(shí)驗(yàn)方法
            2.3.1 連續(xù)觀察和比較各組大鼠的中毒癥狀
            2.3.2 采用分光光度法檢測大鼠血清及腦組織勻漿中膽堿酯酶的活性
            2.3.3 光鏡下觀察染毒大鼠腦組織海馬區(qū)神經(jīng)元細(xì)胞的尼氏染色的結(jié)果
            2.3.4 電鏡下觀察比較各組大鼠腦組織海馬區(qū)神經(jīng)元細(xì)胞結(jié)構(gòu)的變化
            2.3.5 免疫組化的方法比較各組大鼠腦組織海馬區(qū)膽堿酯酶的變化
            2.3.6 Western Blot檢測染毒各組大鼠腦組織的膽堿酯酶表達(dá)情況
            2.3.7 結(jié)果的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3 結(jié)果
        3.1 各組大鼠的中毒癥狀出現(xiàn)的時(shí)間和De Bleeker評分
            3.1.1 中毒癥狀出現(xiàn)的時(shí)間
            3.1.2 各組大鼠的De Bleeker評分
        3.2 染毒各組大鼠血清和大腦皮質(zhì)膽堿酯酶活性
        3.3 各組大鼠腦組織海馬區(qū)神經(jīng)元細(xì)胞的光鏡下尼氏染色的結(jié)果
        3.4 各組大鼠腦組織海馬區(qū)神經(jīng)元細(xì)胞結(jié)構(gòu)的電鏡觀察結(jié)果
        3.5 各組大鼠的腦組織海馬區(qū)膽堿酯酶的免疫組化染色結(jié)果
        3.6 Western Blot檢測各組大鼠腦組織的AchE表達(dá)情況
    4 討論
    5 結(jié)論
本研究的創(chuàng)新性評價(jià)
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間取得的研究成果
致謝
個(gè)人簡介



本文編號：4037587