為獲取河南華溪蟹(Sinopotamon henanense)nanos1、nanos2和piwi基因的表達特征,在前期河南華溪蟹卵巢組織轉(zhuǎn)錄組測序的基礎上,對生殖相關基因nanos1、nanos2和piwi進行了克隆和分析,首次獲得了河南華溪蟹nanos1、nanos2和piwi基因的部分cDNA序列。利用半定量PCR獲取了河南華溪蟹nanos1、nanos2和piwi基因的組織表達譜特征和在卵巢發(fā)育過程中的表達變化規(guī)律。研究結(jié)果顯示,nanos1基因在卵巢、精巢、鰓、心和肌肉中均有表達;nanos2基因在卵巢、精巢、副性腺、心臟、腸和肌肉中有較高表達,且卵巢中表達量高于精巢中表達量;piwi基因特異表達于卵巢和精巢。卵巢發(fā)育中3個基因的表達時序研究顯示,nanos1基因從卵巢發(fā)育的增殖期、小生長期、大生長期到成熟期表達量逐漸升高,與之相反,nanos2和piwi基因的表達呈現(xiàn)相反的趨勢。這些研究結(jié)果將為河南華溪蟹nanos1、nanos2和piwi基因的功能分析奠定基礎。

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圖1 河南華溪蟹nanos1、nanos2和 piwi基因的克隆

根據(jù)河南華溪蟹卵巢轉(zhuǎn)錄組測序結(jié)果,利用Primer5.0設計nanos1、nanos2、piwi基因的特異引物,通過PCR擴增分別得到1182bp、243bp、1951bp的DNA片段(圖1),經(jīng)膠回收、連接、轉(zhuǎn)化、挑取單克隆進行測序,測序結(jié)果經(jīng)Blast比對分析,確....

圖2 nanos1和nanos2分子系統(tǒng)進化樹

利用SqRT-PCR檢測nanos1、nanos2和piwi基因在河南華溪蟹不同組織中的表達情況(圖4A)。結(jié)果顯示,nanos1基因在卵巢、精巢、鰓、心和肌肉中均有表達(圖4A和B);nanos2基因在卵巢、精巢、副性腺、心臟、腸和肌肉中均有表達,且卵巢中表達量比精巢中表達....

圖3 PIWI分子系統(tǒng)進化樹

圖2nanos1和nanos2分子系統(tǒng)進化樹圖4河南華溪蟹nanos1、nanos2、piwi基因的組織特異性表達和灰度分析

圖4 河南華溪蟹nanos1、nanos2、piwi基因的組織特異性表達和灰度分析

圖3PIWI分子系統(tǒng)進化樹2.4nanos1、nanos2、piwi基因在卵巢發(fā)育過程中的表達特征

本文編號：4020995