為獲取河南華溪蟹(Sinopotamon henanense)nanos1、nanos2和piwi基因的表達(dá)特征,在前期河南華溪蟹卵巢組織轉(zhuǎn)錄組測序的基礎(chǔ)上,對生殖相關(guān)基因nanos1、nanos2和piwi進(jìn)行了克隆和分析,首次獲得了河南華溪蟹nanos1、nanos2和piwi基因的部分cDNA序列。利用半定量PCR獲取了河南華溪蟹nanos1、nanos2和piwi基因的組織表達(dá)譜特征和在卵巢發(fā)育過程中的表達(dá)變化規(guī)律。研究結(jié)果顯示,nanos1基因在卵巢、精巢、鰓、心和肌肉中均有表達(dá);nanos2基因在卵巢、精巢、副性腺、心臟、腸和肌肉中有較高表達(dá),且卵巢中表達(dá)量高于精巢中表達(dá)量;piwi基因特異表達(dá)于卵巢和精巢。卵巢發(fā)育中3個(gè)基因的表達(dá)時(shí)序研究顯示,nanos1基因從卵巢發(fā)育的增殖期、小生長期、大生長期到成熟期表達(dá)量逐漸升高,與之相反,nanos2和piwi基因的表達(dá)呈現(xiàn)相反的趨勢。這些研究結(jié)果將為河南華溪蟹nanos1、nanos2和piwi基因的功能分析奠定基礎(chǔ)。

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圖1 河南華溪蟹nanos1、nanos2和 piwi基因的克隆

根據(jù)河南華溪蟹卵巢轉(zhuǎn)錄組測序結(jié)果,利用Primer5.0設(shè)計(jì)nanos1、nanos2、piwi基因的特異引物,通過PCR擴(kuò)增分別得到1182bp、243bp、1951bp的DNA片段(圖1),經(jīng)膠回收、連接、轉(zhuǎn)化、挑取單克隆進(jìn)行測序,測序結(jié)果經(jīng)Blast比對分析,確....

圖2 nanos1和nanos2分子系統(tǒng)進(jìn)化樹

利用SqRT-PCR檢測nanos1、nanos2和piwi基因在河南華溪蟹不同組織中的表達(dá)情況(圖4A)。結(jié)果顯示,nanos1基因在卵巢、精巢、鰓、心和肌肉中均有表達(dá)(圖4A和B);nanos2基因在卵巢、精巢、副性腺、心臟、腸和肌肉中均有表達(dá),且卵巢中表達(dá)量比精巢中表達(dá)....

圖3 PIWI分子系統(tǒng)進(jìn)化樹

圖2nanos1和nanos2分子系統(tǒng)進(jìn)化樹圖4河南華溪蟹nanos1、nanos2、piwi基因的組織特異性表達(dá)和灰度分析

圖4 河南華溪蟹nanos1、nanos2、piwi基因的組織特異性表達(dá)和灰度分析

圖3PIWI分子系統(tǒng)進(jìn)化樹2.4nanos1、nanos2、piwi基因在卵巢發(fā)育過程中的表達(dá)特征

本文編號：4020995