第一章應(yīng)用微陣列芯片技術(shù)篩選非小細(xì)胞肺癌的circRNAs表達(dá)譜研究目的應(yīng)用circRNAs微陣列芯片技術(shù)檢測(cè)非小細(xì)胞肺癌組織和鄰近正常上皮組織差異表達(dá)的circRNAs,初步建立非小細(xì)胞肺癌的circRNAs表達(dá)譜。方法收集3例在南方醫(yī)科大學(xué)珠江醫(yī)院行手術(shù)治療的非小細(xì)胞肺癌患者的肺癌組織和鄰近正常上皮組織,使用Trizol(lInvitrogen)法提取組織總RNA。使用紫外分光光度計(jì)檢測(cè)RNA的濃度和純度,通過(guò)甲醛變色凝膠電泳檢測(cè)RNA完整性。抽提的RNA通過(guò)質(zhì)檢后,擴(kuò)增富集的circRNAs并轉(zhuǎn)錄成熒光cRNA。純化標(biāo)記的cRNA。測(cè)量標(biāo)記的cRNA的濃度和比活性。標(biāo)記完成后,制備50μl雜交溶液并分配到墊片載玻片中并組裝到circRNAs表達(dá)微陣列載玻片上,芯片雜交完成后洗滌,使用Axon GenePix4000B進(jìn)行圖像掃描,提取探針的信號(hào)值,用T檢驗(yàn)來(lái)確定差異表達(dá)基因的顯著性(p<0.05)。使用Fold change和P-value篩選兩組樣品間的差異表達(dá)circRNAs。結(jié)果總RNA質(zhì)量鑒定結(jié)果:總RNA質(zhì)量鑒定結(jié)果:A260/A280比值均接近2.0,A260/...

【文章頁(yè)數(shù)】：80 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－１用于ｃｉｒｃＲＮＡｓ芯片實(shí)驗(yàn)的組織標(biāo)本ＲＮＡ甲醛凝膠電泳圖像??Ｆ．?１－１?ＲＮＡ?ＩｎｔｅｒｉａｎＤＮＡ?ｃｏｎａｍｎａｔｉｏｎ?ｔｅｓｔ?ｂＤｅｎａｔｕｒｉｎＡａｒｓ

雜交后的ｃｉｒｃＲＮＡｓ表達(dá)譜芯片采用Ａｘｏｎ?ＧｅｎｅＰｉｘ?４０００Ｂ進(jìn)行圖像掃描，６??３５ｎｍ波長(zhǎng)光激發(fā)，然后使用ＧｅｎｃＰｉｘ?Ｐｒｏ?６．０讀取芯片掃描圖像，并提収探針??的信號(hào)值。圖１－２為芯片掃描出的代表性圖像，ｃｉｒｃＲＮＡｓ表達(dá)譜芯片雜交點(diǎn)大??小比較相仿，雜....

圖１－２非小細(xì)胞肺癌組織ｃｉｒｃＲＮＡｓ表達(dá)譜芯片雜交代表性圖像

石頁(yè)士學(xué)位論文??圖１－１用于ｃｉｒｃＲＮＡｓ芯片實(shí)驗(yàn)的組織標(biāo)本ＲＮＡ甲醛凝膠電泳圖像??Ｆｉｇ．?１－１?ＲＮＡ?Ｉｎｔｅｇｒｉｔｙ?ａｎｄ?ｇＤＮＡ?ｃｏｎｔａｍｉｎａｔｉｏｎ?ｔｅｓｔ?ｂｙ?Ｄｅｎａｔｕｒｉｎｇ?Ａｇａｒｏｓｅ??Ｇｅｌ?Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ??....

圖１－３散點(diǎn)圖??Ｆｉｇ．?１－３?Ｓｃａｔｔｅｒｐｌｏｔ??

為了明確差異表達(dá)的ｍｉＲＮＡｓ，我們通過(guò)ｃｉｒｃＲＮＡｓ表達(dá)譜芯片火山圖對(duì)篩??選結(jié)果進(jìn)行了過(guò)濾，此火山圖采用的表達(dá)倍數(shù)為上調(diào)２倍以上，或下調(diào)表達(dá)倍??數(shù)超過(guò)２倍，ｐ＜０．０５，見(jiàn)圖１－４。通過(guò)ｃｉｒｃＲＮＡｓ表達(dá)譜芯片篩選，我們發(fā)現(xiàn)，??與正常肺上皮組織相比，非小細(xì)胞肺癌組織表....

圖2一1和非小細(xì)胞肺癌相關(guān)的而R加A及上游的ci代R刊AsFig.2一1MI川a‘哪ociated咐比NSCLCanduPs切即mcircRN^s

石頁(yè)士學(xué)位論文??Ａ?Ｂ??ｈｕ－ｍｌＲ?１￥４?ｉｐ?？＞?ｈｖｉ?ｔｉｉｔＨＮＡ?００？／？Ｗ?ｈｕ－ｒｎｉＲ?１４１?Ｓｐ?？ｔ?ｈｕ?ｔｔｒｃＲＫｌＡ?ＯＯｂＪＳ２ｂ??？?？＇？??

本文編號(hào)：3979583