毛白楊生長迅速,樹干通直挺拔,是我國重要的速生用材樹種和園林綠化樹種,在我國林業(yè)經(jīng)濟(jì)、生態(tài)建設(shè)和城鄉(xiāng)綠化中發(fā)揮著重要的作用。但病蟲危害嚴(yán)重影響毛白楊的正常生長,而葉色單一在一定程度上影響了毛白楊的觀賞度。隨著生物技術(shù)的發(fā)展,利用多基因聚合轉(zhuǎn)化技術(shù)創(chuàng)制同時具有抗蟲和彩葉特性的毛白楊新材料,對于毛白楊種質(zhì)創(chuàng)新具有重要意義。Btcry Ⅱ基因編碼的毒蛋白和絲氨酸蛋白酶抑制劑Bbi基因?qū)[翅目害蟲具有高毒力,CmOr基因可調(diào)控類胡蘿卜素含量以改變?nèi)~色,本實驗采用IRES元件構(gòu)建了多基因聚合表達(dá)載體p CAMBIA1304-Btcry Ⅱ-IRES-CmOrIRES-Luc;利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將其和抗蟲基因表達(dá)載體p CAMBIA1304-Bbi分別轉(zhuǎn)入毛白楊TC1521無性系中,通過抗性篩選、PCR鑒定獲得一批轉(zhuǎn)基因陽性植株;進(jìn)一步通過RT-PCR、qRT-PCR對外源基因的表達(dá)情況進(jìn)行了分析,為后續(xù)進(jìn)行抗蟲試驗、葉片色素測試等生理生化指標(biāo)分析奠定了工作基礎(chǔ)。本研究主要結(jié)果如下:1.以pCAMBIA1304質(zhì)粒為骨架,構(gòu)建了基于IRES元件的多基因聚合表達(dá)載體p CAMBIA1304-Btcry...

【文章頁數(shù)】：58 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖2.3質(zhì)粒載體的PCR檢測結(jié)果

多基因聚合表達(dá)載體設(shè)計與構(gòu)建212.3.2載體的PCR鑒定用提取的質(zhì)粒當(dāng)做DNA模板，經(jīng)PCR檢測發(fā)現(xiàn)（圖2.3），質(zhì)粒載體中都可檢測到BtcryII（773bp）和CmOr（440bp）的目的條帶,證明BtcryII和CmOr基因都已經(jīng)成功轉(zhuǎn)入載體中，基于IRES元件的多基因聚....

圖3.1多基因聚合表達(dá)載體轉(zhuǎn)化后工程菌PCR驗證

根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的植物表達(dá)載體在毛白楊中的遺傳轉(zhuǎn)化25圖3.1多基因聚合表達(dá)載體轉(zhuǎn)化后工程菌PCR驗證Figure3.1PCRverificationofengineeredbacteriawithgenestackingstructureaftertransformationM：....

圖3.2Bbi基因表達(dá)載體轉(zhuǎn)化后工程菌PCR驗證Figure3.2PCRverificationofengineeredbacteriawithBbigeneaftertransformation

根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的植物表達(dá)載體在毛白楊中的遺傳轉(zhuǎn)化25圖3.1多基因聚合表達(dá)載體轉(zhuǎn)化后工程菌PCR驗證Figure3.1PCRverificationofengineeredbacteriawithgenestackingstructureaftertransformationM：....

圖3.3毛白楊TC1521遺傳轉(zhuǎn)化過程

抗蟲彩葉基因聚合表達(dá)載體構(gòu)建及在毛白楊中的轉(zhuǎn)化研究26圖3.3毛白楊TC1521遺傳轉(zhuǎn)化過程Figure3.3GenetictransformationofP.tomentosaTC1521A:預(yù)培養(yǎng)；B~C：選擇培養(yǎng)；D~F：生根培養(yǎng)圖3.4獲得的大量抗性苗Figure3.4A....

本文編號：3970887