�；d體蛋白(ACP)是微生物脂肪酸生物合成途徑中的一個關鍵蛋白。為了促進集胞藻脂肪酸的積累,以集胞藻PCC6803為研究對象,成功構建了用于過量表達ACP(ssl2084)基因的同源重組質(zhì)粒ssl2084~((+))并在集胞藻PCC6803中進行轉(zhuǎn)化。將ssl2084~((+))突變株進行DNA水平和蛋白質(zhì)水平鑒定,結果表明,ssl2084基因已經(jīng)得到過量表達。利用氣相色譜—質(zhì)譜聯(lián)用技術(GC-MS)對突變藻株在不同溫度下脂肪酸的含量及組分進行檢測,發(fā)現(xiàn)在30℃培養(yǎng)條件下ssl2084~((+))突變株中C12:0、C16:0和C18:0的含量顯著增加,分別為1.50、8.74和0.60 mg·g^-1,與野生型相比分別增加了54.71%、50.82%和155.86%;在20℃低溫脅迫培養(yǎng)條件下,C12:0、C16:0和C18:0的含量分別達到1.70、11.85和2.31 mg·g^-1,與野生型相比分別增加了31.94%、47.35%和39.90%。以上結果表明,在集胞藻PCC6803中過表達ssl2084基因能提高集胞藻中的中長鏈脂肪酸的...

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圖1集胞藻PCC6803脂肪酸的合成途徑

�；d體蛋白是一類具有保守絲氨酸殘基的小分子質(zhì)量(9ku)酸性蛋白,在脂肪酸合成過程中,ACP攜帶�；溚瓿煽s合、還原和脫氫等酶促反應。它是不同�；滈L度脂肪酸的acyl-ACP去飽和反應和質(zhì)體類�；D(zhuǎn)移酶作用的輔助因子[14]。目前在集胞藻PCC6803中ACP和脂肪酸合成之....

圖3同源重組平臺p5S1285UD的構建

Pcpc560基因的大小為560bp,ssl2084基因的大小為260bp。Pcpc560和ssl2084基因片段進行融合后的片段Pssl2084大小約為820bp。用SalⅠ、EcoRⅠ對Pssl2084片段與p5S1285UD質(zhì)粒雙酶切、以SmaⅠ對p5S1285UD+....

圖2同源重組平臺p5S1285UD和同源重組質(zhì)粒ssl2084(+)的構建圖譜

表1引物列表Table1Primersusedinthisstudy引物Primer序列Sequence(5′-3′)Pcpc560-SalI-FAATGTCGACACCTGTAGAGAAGAGTCCCTPcpc560-RTGAATTAATCTCCT....

圖4同源重組質(zhì)粒ssl2084(+)的構建

分別以野生型集胞藻PCC6803和ssl2084(+)突變株的基因組DNA為模板,用以下引物對擴增:Pcpc560-SalⅠ-F和ssl2084-EcoRⅠ-His-R、Pcpc560-SalⅠ-F和T1T2-R、slr1285U-KpnⅠ-F和ssl2084-EcoRⅠ-His....

本文編號：3968026