目的探討人胚肺二倍體成纖維細(xì)胞(2BS)衰老過程中POLD1基因表達(dá)下降的甲基化調(diào)控機(jī)制。方法按傳代情況將2BS分為年輕細(xì)胞組(25PD)、衰老細(xì)胞組(55PD)。采用反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)和蛋白免疫印跡(Western blot)法檢測2BS衰老過程中POLD1 mRNA和蛋白表達(dá)水平的變化,利用亞硫酸氫鹽修飾后測序法(BSP)分析2BS衰老過程中POLD1基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化狀態(tài)的變化,應(yīng)用甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑5-氮雜-2′-脫氧胞苷(5-Aza-dc)處理2BS(48PD),RT-PCR檢測處理前后POLD1 mRNA表達(dá)變化,分析2BS衰老過程中POLD1基因甲基化及去甲基化對(duì)POLD1 mRNA表達(dá)的影響及二者之間的關(guān)系。結(jié)果與年輕細(xì)胞組比較,衰老細(xì)胞組POLD1 mRNA和蛋白表達(dá)水平均顯著降低(P<0.01),POLD1啟動(dòng)子區(qū)甲基化水平顯著增高(P<0.01),且POLD1 mRNA表達(dá)水平與其啟動(dòng)子區(qū)甲基化水平呈負(fù)相關(guān)(n=6,r²=0.853,P=0.009);經(jīng)5-Aza-dc處理后,POLD1 mRNA表達(dá)水平增高(P&...

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

圖1不同代齡2BSPOLD1mRNA表達(dá)水平

表2BSP相關(guān)引物信息CpG島引物序列(5′→3′)長度(bp)1正向引物1-1:TGAGTTTAATTTACGTATAGGG反向引物1-1:GTACGCCAACACAGTGCTGTC正向引物2-1:GAGAATAGATTAAGTTAGGATTTTAT反向引物2-1....

圖2不同代齡2BSPOLD1蛋白表達(dá)水平

圖1不同代齡2BSPOLD1mRNA表達(dá)水平圖3不同代齡2BSPOLD1啟動(dòng)子區(qū)甲基化水平

圖3不同代齡2BSPOLD1啟動(dòng)子區(qū)甲基化水平

圖2不同代齡2BSPOLD1蛋白表達(dá)水平4.POLD1mRNA表達(dá)與啟動(dòng)子甲基化的關(guān)系:分析年輕和衰老2BSPOLD1mRNA表達(dá)水平和其啟動(dòng)子甲基化水平相關(guān)性(圖4)。POLD1啟動(dòng)子區(qū)甲基化水平與其mRNA表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)(n=6,r2=0.853,P=0.009....

圖4POLD1啟動(dòng)子區(qū)甲基化水平與其mRNA表達(dá)水平的相關(guān)性分析

POLD1是DNA復(fù)制和損傷修復(fù)中最重要的基因之一,位于第19號(hào)染色體q13.3-q13.4上,其cDNA全長約3.5kb,編碼1107個(gè)氨基酸[6]。POLD1基因缺陷不僅與腫瘤關(guān)系密切,也增加早老綜合征如沃納綜合征(Wernersyndrome)的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)[8～11]。此外....

本文編號(hào)：3965275