鈣依賴蛋白激酶在植物生長發(fā)育及生物和非生物脅迫響應(yīng)過程中發(fā)揮重要作用。本文從野生番茄潘那利中獲得了一個鈣依賴蛋白激酶基因SpCPK8,對其進行了理化性質(zhì)、蛋白結(jié)構(gòu)、進化樹、原核表達和亞細胞定位分析。結(jié)果顯示,該基因包含一個1 674 bp的完整開放讀框,編碼557個氨基酸,主要定位于細胞膜上;SDS-PAGE電泳及Western blot結(jié)果顯示, SpCPK8重組蛋白的分子量約為62.22 kDa;進化樹分析發(fā)現(xiàn),其編碼的氨基酸與馬鈴薯StCDPK4親緣關(guān)系最近。RT-qPCR分析發(fā)現(xiàn), SpCPK8在葉片中的表達量最高,且在干旱脅迫下表達量顯著上調(diào),能夠積極響應(yīng)干旱脅迫。本實驗結(jié)果表明野生番茄SpCPK8是積極響應(yīng)干旱脅迫的調(diào)節(jié)因子,為進一步研究植物CDPK的功能提供理論基礎(chǔ)。

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圖1潘那利番茄SpCPK8基因的cDNA擴增(A)及重組質(zhì)粒pET-30a-SpCPK8的雙酶切鑒定(B)

測序結(jié)果顯示SpCPK8基因序列全長為1674bp,編碼557個氨基酸,其分子量大小為62.22kDa,理論等電點為5.55;其中含45個絲氨酸(Ser)8.1%、44個亮氨酸(Leu)7.9%、42個甘氨酸(Gly)7.5%,預(yù)測分子式為C2730H4282N758O847....

圖2SpCPK8進化樹分析

CDPK被認為是植物響應(yīng)非生物脅迫的關(guān)鍵激酶(Valmonte等2014),它幾乎在植物的所有部位均有表達。自1984年在豌豆(Pisumsativum)中發(fā)現(xiàn)第一個植物CDPK基因后(Hetherington和Trewavas1984),目前已在擬南芥(Arabidopsis....

圖3SpCPK8及其高度同源蛋白的保守結(jié)構(gòu)域分析

在CDPK家族的4個特征結(jié)構(gòu)域中,不同物種的N端結(jié)構(gòu)域序列差異很大,其長度與蛋白質(zhì)定位相關(guān)(Schulz等2013)。CDPKs表現(xiàn)出的多種亞細胞定位模式,表明它們參與了多種信號通路。研究表明,CDPK中的肉豆蔻�；蛄信c膜定位相關(guān)(Resh2006),一些肉豆蔻�；牡鞍踪|(zhì)需....

圖4SpCPK8表達模式分析

圖3SpCPK8及其高度同源蛋白的保守結(jié)構(gòu)域分析圖5SDS-PAGE電泳及Westernblot檢測

本文編號：3956723