發(fā)布時(shí)間：2024-04-14 02:28

　　背景:阿爾茲海默病(Alzheimer’s Disease,AD)是與增齡相關(guān)、以漸進(jìn)性認(rèn)知功能障礙和記憶減退為主要癥狀、最常見(jiàn)的癡呆類型。作為老年期復(fù)雜中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性變性疾病,AD具有多基因遺傳背景,且發(fā)病機(jī)制復(fù)雜。膽固醇代謝穩(wěn)態(tài)失調(diào)與認(rèn)知功能障礙和AD有關(guān),膽固醇調(diào)節(jié)相關(guān)的遺傳變異也關(guān)聯(lián)認(rèn)知功能障礙和AD風(fēng)險(xiǎn),然其機(jī)制依然不清。因此,在基因組和轉(zhuǎn)錄組水平開展AD病因?qū)W相關(guān)的系統(tǒng)研究將有助于探索AD的病因、生物標(biāo)志物和致病機(jī)制,具有潛在的臨床實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。目的:1、在中國(guó)AD人群中識(shí)別新的AD風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)膽固醇調(diào)節(jié)基因遺傳變異及驗(yàn)證候選AD風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)基因變異并進(jìn)行功能分析。2、在課題組前期研究基礎(chǔ)上開展膽固醇調(diào)節(jié)基因APOC1體外分子機(jī)制研究,初步探索AD潛在的致病機(jī)制。3、探索功能相關(guān)AD轉(zhuǎn)錄組水平差異表達(dá)譜。方法:1、在854例AD患者、1059例AD源性輕度認(rèn)知功能障礙(MCI-AD)患者和1254例認(rèn)知正常老年對(duì)照共計(jì)3167例樣本中,對(duì)12個(gè)膽固醇調(diào)節(jié)相關(guān)核受體基因和APOE共計(jì)13個(gè)基因進(jìn)行靶向測(cè)序,篩選潛在變異并進(jìn)行識(shí)別、驗(yàn)證和初步功能分析。2、利用分子微陣列質(zhì)譜分型平臺(tái)...

【文章頁(yè)數(shù)】：136 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

圖3pGL3-promotor結(jié)構(gòu)示意圖

北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院博士學(xué)位論文重復(fù)，測(cè)定吸光度（０Ｄ）值；??待ＡＰ４０反應(yīng)孔顯色３０ｍｉｎ后，加入ｓｔｏｐ?ｓｏｌｕｔｉｏｎｌＯＯ＾Ｌ于每空內(nèi)，吹打混？?Ｉｎｆｉｎｉｔｅ?２０００?ｐｒｏ?酶標(biāo)儀測(cè)定?ＯＤ?值；??取梯度標(biāo)準(zhǔn)品ＯＤ值，利用Ｃｕｒｖｅ?ｅｘｐｅｒｔ?ｖｌ４．０軟件建....

圖8pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR結(jié)構(gòu)示意圖

用ＰＬＩＮＫ１．９０對(duì)據(jù)進(jìn)行質(zhì)后進(jìn)行關(guān)聯(lián)分目標(biāo)變異致病性分析。??固醇調(diào)節(jié)基因ＡＰ０Ｃ７體外研宄??課題組前期薈萃（ｍｅｔａ）分析發(fā)現(xiàn)，在東亞人群、高加索人群和西班牙裔人群醇調(diào)節(jié)基因ＡＰＯＣＪ基因變異增加ＡＤ患病風(fēng)險(xiǎn)發(fā)現(xiàn)ｎ。同時(shí)，基于本課題組的ＡＤ隊(duì)列人群研究，ＪＰＯＣ７基因變異....

圖１１慢病毒包裝流程??Ｆｉｇｕｒｅ?１１?Ｆｌｏｗｃｈａｒｔ?ｏｆ?Ｌｅｎｔｉｖｉｒｕｓ?ｐａｃｋａｇｉｎｇ??

??包裝流程如圖１１所示。將ｐｌｅｎｔｉ６．３－ＥＧＦＰ－ＡＰＯＣｌ慢病毒載體和包裝質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染??ＨＥＫ２９３Ｔ細(xì)胞獲得病毒顆粒，采用ＲＴ－ｑＰＣＲ法檢測(cè)靶基因ＲＮＡ水平。??Ｏ?Ｃ?二＞?？鴒?１?〇??〇?＇?ｗ：?？??病毐＆包裝質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染靶細(xì)胞收獲病毒顆粒濃縮滴度檢測(cè)??....

圖１３鏈特異性ＲＮＡ－ｓｅｑ數(shù)據(jù)分析流程圖??Ｆｉｇｕｒｅ?１３?Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃ?ａｎａｌｙｓｉｓ?ｏｆ?ＲＮＡ－ｓｅｑ?ｄａｔａ??１、ｍＲＮＡ分析??（１）原始測(cè)序數(shù)據(jù)（ｒａｗ?ｄａｔａ）分析和質(zhì)控??

北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院博士學(xué)位論文控??庫(kù)??序??、雜交及稀釋??ｔｅｒ）生成：將流動(dòng)池（Ｆｌｏｗｃｅｌｌ）和準(zhǔn)備好的文庫(kù)在ｃＢｏｔ測(cè)序：將完成簇生成的流動(dòng)池轉(zhuǎn)移到測(cè)序儀上，選擇正確據(jù)分析??所示，對(duì)測(cè)序得到的原始雙端序列進(jìn)行質(zhì)控和過(guò)濾后，行比對(duì)，基于比對(duì)結(jié)果分別進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)分析和高級(jí)分析....

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