研究背景:肺上皮細(xì)胞再上皮化對(duì)ARDS的修復(fù)過(guò)程非常重要。磷酸化作用影響著轉(zhuǎn)錄因子的泛素化、穩(wěn)定性及活性,從而調(diào)節(jié)了多種細(xì)胞功能。轉(zhuǎn)錄因子E2F1調(diào)節(jié)Peg10基因的表達(dá),促進(jìn)細(xì)胞的增殖。但是,E2F1的穩(wěn)定性對(duì)Peg10表達(dá)的作用及磷酸化對(duì)E2F1穩(wěn)定性的分子調(diào)節(jié)機(jī)制尚不清楚。USP11是一種DUBs,可以逆轉(zhuǎn)多聚泛素化的蛋白底物,對(duì)于調(diào)節(jié)蛋白功能及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)具有重要意義。有研究指出去泛素化酶UCH37和POH1介導(dǎo)E2F1的去泛素化,增加E2F1的穩(wěn)定性。本研究主要針對(duì)USP11對(duì)E2F1蛋白去泛素化及蛋白穩(wěn)定性的影響,探討USP11在肺損傷后修復(fù)中的作用機(jī)制。實(shí)驗(yàn)方法:[1]通過(guò)轉(zhuǎn)染Usp11 Sh RNA質(zhì)粒下調(diào)USP11后,采用Western Blot法和q RT-PCR方法測(cè)定PEG10的蛋白和m RNA水平。[2]通過(guò)轉(zhuǎn)染E2f1 si RNA質(zhì)粒下調(diào)E2F1或者轉(zhuǎn)染Usp11 Sh RNA質(zhì)粒下調(diào)USP11后通過(guò)轉(zhuǎn)染HA-E2f1質(zhì)粒過(guò)表達(dá)E2F1,采用Western Blot法和q RT-PCR方法測(cè)定PEG10蛋白和m RNA水平;通過(guò)轉(zhuǎn)染Usp11 Sh RNA質(zhì)粒...

【文章頁(yè)數(shù)】：80 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
前言
中文摘要
Abstract
中英文縮略詞對(duì)照表
第1章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 急性肺損傷（ALI）/急性呼吸窘迫綜合征（ARDS）的概述
        1.1.1 ALI/ARDS的現(xiàn)狀
        1.1.2 病因
        1.1.3 發(fā)病機(jī)制
        1.1.4 診斷
        1.1.5 治療
    1.2 肺泡上皮細(xì)胞損傷及修復(fù)對(duì)ARDS預(yù)后的影響
        1.2.1 肺泡上皮細(xì)胞損傷在ARDS中的作用
        1.2.2 肺泡上皮細(xì)胞在蛋白水腫液形成和清除中的作用
        1.2.3 肺泡上皮損傷機(jī)制
        1.2.4 肺泡上皮細(xì)胞完整性的維持、修復(fù)及重構(gòu)
    1.3 泛素-蛋白酶體系統(tǒng)與蛋白質(zhì)的降解
        1.3.1 泛素與泛素化
        1.3.2 蛋白酶體復(fù)合物
        1.3.3 去泛素化和去泛素化酶
    1.4 PEG10在細(xì)胞增殖移形中的作用
    1.5 轉(zhuǎn)錄因子E2F1對(duì)PEG10調(diào)節(jié)作用
    1.6 UPS對(duì)E2F1的調(diào)節(jié)作用
第2章 實(shí)驗(yàn)材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 細(xì)胞系及培養(yǎng)條件
        2.1.2 主要試劑及來(lái)源
        2.1.3 主要儀器
        2.1.4 常用試劑的配制
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)和復(fù)蘇
        2.2.2 Usp11Sh RNA慢病毒制備及轉(zhuǎn)染
        2.2.3 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
        2.2.4 Westernblot方法測(cè)定目的蛋白濃度
        2.2.5 免疫沉淀反應(yīng)
        2.2.6 細(xì)胞免疫熒光染色
        2.2.7 泛素分析
        2.2.8 實(shí)時(shí)熒光定量PCR進(jìn)行目的基因m RNA檢測(cè)
        2.2.9 細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)
        2.2.10 電子細(xì)胞基質(zhì)阻抗測(cè)定（ECIS）測(cè)量細(xì)胞增殖和遷移
    2.3 數(shù)據(jù)的獲取及分析
        2.3.1 數(shù)據(jù)的獲取
        2.3.2 統(tǒng)計(jì)分析
第3章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.1 USP11調(diào)節(jié)Peg10的表達(dá)
    3.2 USP11通過(guò)增加轉(zhuǎn)錄因子E2F1的水平上調(diào)Peg10的表達(dá)
    3.3 USP11去泛素化和穩(wěn)定E2F1
    3.4 核USP11對(duì)調(diào)節(jié)E2F1至關(guān)重要
    3.5 GSK3β介導(dǎo)E2F1的磷酸化促進(jìn)E2F1的去泛素化和穩(wěn)定性
    3.6 GSK3β促進(jìn)E2F1和USP11相結(jié)合
    3.7 USP11通過(guò)穩(wěn)定E2F1促進(jìn)細(xì)胞增殖和遷移
第4章 討論
第5章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
作者簡(jiǎn)介及在學(xué)期間所取得的科研成果
致謝



本文編號(hào)：3948035