研究背景:肺上皮細胞再上皮化對ARDS的修復過程非常重要。磷酸化作用影響著轉錄因子的泛素化、穩(wěn)定性及活性,從而調節(jié)了多種細胞功能。轉錄因子E2F1調節(jié)Peg10基因的表達,促進細胞的增殖。但是,E2F1的穩(wěn)定性對Peg10表達的作用及磷酸化對E2F1穩(wěn)定性的分子調節(jié)機制尚不清楚。USP11是一種DUBs,可以逆轉多聚泛素化的蛋白底物,對于調節(jié)蛋白功能及信號轉導具有重要意義。有研究指出去泛素化酶UCH37和POH1介導E2F1的去泛素化,增加E2F1的穩(wěn)定性。本研究主要針對USP11對E2F1蛋白去泛素化及蛋白穩(wěn)定性的影響,探討USP11在肺損傷后修復中的作用機制。實驗方法:[1]通過轉染Usp11 Sh RNA質粒下調USP11后,采用Western Blot法和q RT-PCR方法測定PEG10的蛋白和m RNA水平。[2]通過轉染E2f1 si RNA質粒下調E2F1或者轉染Usp11 Sh RNA質粒下調USP11后通過轉染HA-E2f1質粒過表達E2F1,采用Western Blot法和q RT-PCR方法測定PEG10蛋白和m RNA水平;通過轉染Usp11 Sh RNA質粒...

【文章頁數(shù)】：80 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
前言
中文摘要
Abstract
中英文縮略詞對照表
第1章 文獻綜述
    1.1 急性肺損傷（ALI）/急性呼吸窘迫綜合征（ARDS）的概述
        1.1.1 ALI/ARDS的現(xiàn)狀
        1.1.2 病因
        1.1.3 發(fā)病機制
        1.1.4 診斷
        1.1.5 治療
    1.2 肺泡上皮細胞損傷及修復對ARDS預后的影響
        1.2.1 肺泡上皮細胞損傷在ARDS中的作用
        1.2.2 肺泡上皮細胞在蛋白水腫液形成和清除中的作用
        1.2.3 肺泡上皮損傷機制
        1.2.4 肺泡上皮細胞完整性的維持、修復及重構
    1.3 泛素-蛋白酶體系統(tǒng)與蛋白質的降解
        1.3.1 泛素與泛素化
        1.3.2 蛋白酶體復合物
        1.3.3 去泛素化和去泛素化酶
    1.4 PEG10在細胞增殖移形中的作用
    1.5 轉錄因子E2F1對PEG10調節(jié)作用
    1.6 UPS對E2F1的調節(jié)作用
第2章 實驗材料與方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 細胞系及培養(yǎng)條件
        2.1.2 主要試劑及來源
        2.1.3 主要儀器
        2.1.4 常用試劑的配制
    2.2 實驗方法
        2.2.1 細胞培養(yǎng)和復蘇
        2.2.2 Usp11Sh RNA慢病毒制備及轉染
        2.2.3 細胞轉染
        2.2.4 Westernblot方法測定目的蛋白濃度
        2.2.5 免疫沉淀反應
        2.2.6 細胞免疫熒光染色
        2.2.7 泛素分析
        2.2.8 實時熒光定量PCR進行目的基因m RNA檢測
        2.2.9 細胞劃痕實驗
        2.2.10 電子細胞基質阻抗測定（ECIS）測量細胞增殖和遷移
    2.3 數(shù)據(jù)的獲取及分析
        2.3.1 數(shù)據(jù)的獲取
        2.3.2 統(tǒng)計分析
第3章 實驗結果
    3.1 USP11調節(jié)Peg10的表達
    3.2 USP11通過增加轉錄因子E2F1的水平上調Peg10的表達
    3.3 USP11去泛素化和穩(wěn)定E2F1
    3.4 核USP11對調節(jié)E2F1至關重要
    3.5 GSK3β介導E2F1的磷酸化促進E2F1的去泛素化和穩(wěn)定性
    3.6 GSK3β促進E2F1和USP11相結合
    3.7 USP11通過穩(wěn)定E2F1促進細胞增殖和遷移
第4章 討論
第5章 結論
參考文獻
作者簡介及在學期間所取得的科研成果
致謝



本文編號：3948035