自2015年以來(lái),國(guó)內(nèi)雞群因禽腺病毒(Fowl adenoviruses,FAdV)感染引起的雞肝炎-心包積液綜合征(Hepatitis and Hydropericardium Syndrome,HHS)的病例呈逐年上升趨勢(shì)。HHS主要多發(fā)于3～5周齡肉雞,偶爾在10～20周齡蛋雞中出現(xiàn),給國(guó)內(nèi)養(yǎng)禽業(yè)造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。流行病學(xué)調(diào)查顯示,國(guó)內(nèi)雞群中FAdV的流行毒株主要是高致病性血清4型禽腺病毒(FAdV-4)。國(guó)外市場(chǎng)雖然已有部分商品化的FAdV滅活疫苗和弱毒活疫苗,但價(jià)格昂貴,難以在國(guó)內(nèi)推廣。目前,國(guó)內(nèi)己有多項(xiàng)與FAdV-4相關(guān)的疫苗專利申請(qǐng)成功,包括各種滅活苗、基因工程亞單位疫苗和DNA疫苗,但尚沒(méi)有針對(duì)FAdV-4的商品化疫苗。本研究首先通過(guò)反向遺傳學(xué)操作以改造后致弱的基因Ⅶ型新城疫病毒(NDV)毒株(MG7)為載體(其F蛋白裂解位點(diǎn)從原堿基序列突變?yōu)長(zhǎng)aSota疫苗株F蛋白的裂解位點(diǎn)),構(gòu)建表達(dá)FAdV-4 Fiber2抗原基因的重組質(zhì)粒并進(jìn)行病毒拯救。接著通過(guò)檢測(cè)雞胚平均死亡時(shí)間(MDT)、1日齡SPF雛雞顱內(nèi)接種致病指數(shù)(ICPI)和6周齡SPF雞靜脈接種致病指數(shù)(I...

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－２?ｐＢＳＫ－ＭＧ７－Ｆｉｂｅｒ２的構(gòu)建示意圖??Ｆｉｇ．?１－２?Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ?ｏｆ?ｐＢＳＫ－ＭＧ７－Ｆｉｂｅｒ２??

１．２．２?ｒＮＤＶ－Ｆｉｂｅｒ２的生物學(xué)特性研究??１．２．２．１病毒拯救及鑒定??預(yù)先在６孔細(xì)胞板中鋪好ＢＨＫ－２１細(xì)胞，在其長(zhǎng)至約８０?％單層時(shí)，棄去培養(yǎng)液，??用Ｏｐｔｉ－ＤＭＥＭ洗滌３次后，再加入表達(dá)Ｔ７?ＲＮＡ聚合酶的ＶＶＴ７重組痘病毒??（０．０１ＭＯＩ），置于３７....

圖２－１?ｆ７＆／＊２基因ＰＣＲ擴(kuò)增結(jié)果??Ｆｉｇ．?２－１?ＰＣＲ?ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｔｈｅ?Ｆｉｂｅｒ２??Ｍ：?ＤＬ２０００ＤＮＡ分子標(biāo)記；１：陰性對(duì)照；２：?Ｆ／＆ｒ２基因擴(kuò)增產(chǎn)物??

２結(jié)果與分析??２．１重組病毒ｒＮＤＶ－Ｆｉｂｅｒ２的構(gòu)建及拯救??２．１．１?Ｆ／６ｅｒ２目的基因的擴(kuò)增??以ｐＲＫ－Ｆｉｂｅｒ２質(zhì)粒為模板，通過(guò)特異性的ＰＣＲ引物擴(kuò)增到大小約為１４４０?ｂｐ的??特異性條帶，與預(yù)期大小相符合（見(jiàn)圖２－１）。??Ｍ?１?２??：０００ｂｐ＾＾Ｈ....

圖２－３拯救病毒的血凝試驗(yàn)??Ｆｉｇ．?２－３?ＩＩＡ?ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ?ｏｆ?ｒＮＤＶ－Ｆｉｂｅｒ２??

１?２?Ｍ???１５０００ｂｐ??７５００ｂ?ｐ??ＳＯＯＯｂｐ??２５００ｂｐ??ｌＯＯＯｂｐ??２５０ｂｐ??圖２－２?ｐＢＳＫ－ＭＧ７－Ｆｉｂｅｒ２酶切驗(yàn)證鑒定結(jié)果??Ｆｉｇ．?２－２?Ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ?ｅｎｚｙｍｅ?ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ?ｏｆ?ｐＢＳＫ－ＭＧ７－Ｆｉｂ....

圖２－２?ｐＢＳＫ－ＭＧ７－Ｆｉｂｅｒ２酶切驗(yàn)證鑒定結(jié)果??Ｆｉｇ．?２－２?Ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ?ｅｎｚｙｍｅ?ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ?ｏｆ?ｐＢＳＫ－ＭＧ７－Ｆｉｂｅｒ２??

１?２?Ｍ???１５０００ｂｐ??７５００ｂ?ｐ??ＳＯＯＯｂｐ??２５００ｂｐ??ｌＯＯＯｂｐ??２５０ｂｐ??圖２－２?ｐＢＳＫ－ＭＧ７－Ｆｉｂｅｒ２酶切驗(yàn)證鑒定結(jié)果??Ｆｉｇ．?２－２?Ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ?ｅｎｚｙｍｅ?ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ?ｏｆ?ｐＢＳＫ－ＭＧ７－Ｆｉｂ....

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