板栗是四大堅果之一,具有重要的經(jīng)濟價值和營養(yǎng)價值。板栗在我國適應(yīng)性強,分布范圍廣泛,具有重要的生態(tài)價值,也是貧困山區(qū)脫貧致富的重要樹種。板栗疫病的發(fā)生阻礙了板栗的增收增產(chǎn),嚴重時造成全株死亡。蛋白激發(fā)子能夠引發(fā)植物的免疫反應(yīng),增強植物的抗逆能力,在植物抗病害過程中起著重要作用,目前關(guān)于板栗疫病蛋白激發(fā)子的研究還未見報道。本文以板栗疫病為研究對象,通過與已知蛋白激發(fā)子進行同源性比對,進行栗疫菌蛋白激發(fā)子PECp1(Protein elicitor of Cryphonectria parasitica 1)片段的克隆,并進行原核表達,優(yōu)化其表達條件,并將表達出的蛋白作用于植物種子和幼苗,分析了栗疫菌蛋白激發(fā)子的結(jié)構(gòu),同時也為深入研究該蛋白的功能奠定了理論基礎(chǔ),本研究取得的主要成果如下：1.栗疫菌蛋白激發(fā)子PECp1的基因克�。和ㄟ^與已知的蛋白激發(fā)子進行同源性比對,采用同源克隆,擴增出PECp1的DNA片段,通過RT-PCR擴增出PECp1的cDNA片段,將DNA和cDNA序列進行比對,PECp1的DNA全長824bp,包含兩段總長為204bp的內(nèi)含子,PECp1的cDNA全長618bp,...

【文章頁數(shù)】：62 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２昨Ｔ－２８ａ質(zhì)粒幽譜??Ｆｉｇｕｒｅ２?ｐｌａｓｍｉｄ?ｍａｐ?ｏｆ?ｐＥＴ－２８ａ??（３）連接產(chǎn)物驗證??

圖２昨Ｔ－２８ａ質(zhì)粒幽譜??Ｆｉｇｕｒｅ２?ｐｌａｓｍｉｄ?ｍａｐ?ｏｆ?ｐＥＴ－２８ａ??３）連接產(chǎn)物驗證??．Ｔ７引物驗證將上述連接產(chǎn)物按照２．３．４方法轉(zhuǎn)化ＤＨ５ａ（把抗生素換挑取單菌落于５?ｍＬ含Ｋａｎ抗生素的ＬＢ液體中，巧‘Ｃ，?１５０?ｒｍｐ培養(yǎng)１２行菌液ＰＣ民鑒定，....

圖３?ＤＮＡ溫度梯度ＰＣ民??Ｆｉｇｕｒｅｓ?ＰＣＲ?ｏｆ?ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ?ｇｒａｄｉｅｎｔ?ｏｆ?ＤＮＡ??Ｍ：ｍａｒｋｅｒＤＬ２０００；ｌ：５４．４?ｒ；２：５４．９

與分析??Ａ目的片段擴増??火溫度和引物的特異性對ＰＣＲ的結(jié)果影響最為顯著，采用／＞ｅｗ７－Ｆ－民特異性引物，退火溫度５７．４±３’Ｃ做溫度梯度ＰＣＲ，結(jié)果表明用該引得一條位于７５０ｂｐ－１０００ｂｐ的條帶，并且退火溫度越高，特異性越好。??ｂｐ??

圖４ＲＮＡ電泳圖??Ｆｉｇｕｒｅ４?Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ?ｍａｐ?ｏｆ?ＲＮＡ??

ＴＧＴＧＣＣＣＣＣＡＣＣＣＣＧＣＣＴＴＴＴＡＴＡＣＣＴＴＴＧＴＣＴＡＣＡＧＴＧＴＣＴＴＣＧＧＴＧＡＧＧＣＣＡＣＴＧＣＴＧＣＣＣＡＧＣＡＧＣＴＣＧＣＣＧＣＣＧＣＣＧＣＴＡＧＣＡＡＧＧＣＣＧＴＣＧＡＧＧＧＴＧＧＴＧＡＴＧＡＴＧＧＴＧＡＧＧＡＧＧＴＣＧＡＣＧＣＴＧＡＧＧＧＴＡＡＧＧＣＣ....

圖５ｃＤＮＡ擴增圖??Ｆｉｇｕｒｅｓ?ｔｈｅ?ＰＣＲ?ｏｆ?ｃＤＮＡ?（Ｍ：ｍａｒｋｅｒ?ＤＬ２０００）??將上述ＰＣＲ產(chǎn)物連接到ｐＭＤ１９－Ｔ，挑取單克隆進行菌落ＰＣＲ和測序驗證，??

圖５ｃＤＮＡ擴增圖??Ｆｉｇｕｒｅｓ?ｔｈｅ?ＰＣＲ?ｏｆ?ｃＤＮＡ?（Ｍ：ｍａｒｋｅｒ?ＤＬ２０００）??述ＰＣＲ產(chǎn)物連接到ｐＭＤ１９－Ｔ，挑取單克隆進行菌落ＰＣＲ和測利用ｆｅｃｐＪ－Ｆ和ｉ＾ｅｃｐＪ－Ｒ引物能夠從板栗疫菌中獲得長度為６１８ｂ結(jié)果為；??ＡＴＧＧＣＣＡＡＣＣＣＴ....

本文編號：3934850