板栗是四大堅(jiān)果之一,具有重要的經(jīng)濟(jì)價(jià)值和營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。板栗在我國(guó)適應(yīng)性強(qiáng),分布范圍廣泛,具有重要的生態(tài)價(jià)值,也是貧困山區(qū)脫貧致富的重要樹(shù)種。板栗疫病的發(fā)生阻礙了板栗的增收增產(chǎn),嚴(yán)重時(shí)造成全株死亡。蛋白激發(fā)子能夠引發(fā)植物的免疫反應(yīng),增強(qiáng)植物的抗逆能力,在植物抗病害過(guò)程中起著重要作用,目前關(guān)于板栗疫病蛋白激發(fā)子的研究還未見(jiàn)報(bào)道。本文以板栗疫病為研究對(duì)象,通過(guò)與已知蛋白激發(fā)子進(jìn)行同源性比對(duì),進(jìn)行栗疫菌蛋白激發(fā)子PECp1(Protein elicitor of Cryphonectria parasitica 1)片段的克隆,并進(jìn)行原核表達(dá),優(yōu)化其表達(dá)條件,并將表達(dá)出的蛋白作用于植物種子和幼苗,分析了栗疫菌蛋白激發(fā)子的結(jié)構(gòu),同時(shí)也為深入研究該蛋白的功能奠定了理論基礎(chǔ),本研究取得的主要成果如下：1.栗疫菌蛋白激發(fā)子PECp1的基因克�。和ㄟ^(guò)與已知的蛋白激發(fā)子進(jìn)行同源性比對(duì),采用同源克隆,擴(kuò)增出PECp1的DNA片段,通過(guò)RT-PCR擴(kuò)增出PECp1的cDNA片段,將DNA和cDNA序列進(jìn)行比對(duì),PECp1的DNA全長(zhǎng)824bp,包含兩段總長(zhǎng)為204bp的內(nèi)含子,PECp1的cDNA全長(zhǎng)618bp,...

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖２昨Ｔ－２８ａ質(zhì)粒幽譜??Ｆｉｇｕｒｅ２?ｐｌａｓｍｉｄ?ｍａｐ?ｏｆ?ｐＥＴ－２８ａ??（３）連接產(chǎn)物驗(yàn)證??

圖２昨Ｔ－２８ａ質(zhì)粒幽譜??Ｆｉｇｕｒｅ２?ｐｌａｓｍｉｄ?ｍａｐ?ｏｆ?ｐＥＴ－２８ａ??３）連接產(chǎn)物驗(yàn)證??．Ｔ７引物驗(yàn)證將上述連接產(chǎn)物按照２．３．４方法轉(zhuǎn)化ＤＨ５ａ（把抗生素?fù)Q挑取單菌落于５?ｍＬ含Ｋａｎ抗生素的ＬＢ液體中，巧‘Ｃ，?１５０?ｒｍｐ培養(yǎng)１２行菌液ＰＣ民鑒定，....

圖３?ＤＮＡ溫度梯度ＰＣ民??Ｆｉｇｕｒｅｓ?ＰＣＲ?ｏｆ?ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ?ｇｒａｄｉｅｎｔ?ｏｆ?ＤＮＡ??Ｍ：ｍａｒｋｅｒＤＬ２０００；ｌ：５４．４?ｒ；２：５４．９

與分析??Ａ目的片段擴(kuò)増??火溫度和引物的特異性對(duì)ＰＣＲ的結(jié)果影響最為顯著，采用／＞ｅｗ７－Ｆ－民特異性引物，退火溫度５７．４±３’Ｃ做溫度梯度ＰＣＲ，結(jié)果表明用該引得一條位于７５０ｂｐ－１０００ｂｐ的條帶，并且退火溫度越高，特異性越好。??ｂｐ??

圖４ＲＮＡ電泳圖??Ｆｉｇｕｒｅ４?Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ?ｍａｐ?ｏｆ?ＲＮＡ??

ＴＧＴＧＣＣＣＣＣＡＣＣＣＣＧＣＣＴＴＴＴＡＴＡＣＣＴＴＴＧＴＣＴＡＣＡＧＴＧＴＣＴＴＣＧＧＴＧＡＧＧＣＣＡＣＴＧＣＴＧＣＣＣＡＧＣＡＧＣＴＣＧＣＣＧＣＣＧＣＣＧＣＴＡＧＣＡＡＧＧＣＣＧＴＣＧＡＧＧＧＴＧＧＴＧＡＴＧＡＴＧＧＴＧＡＧＧＡＧＧＴＣＧＡＣＧＣＴＧＡＧＧＧＴＡＡＧＧＣＣ....

圖５ｃＤＮＡ擴(kuò)增圖??Ｆｉｇｕｒｅｓ?ｔｈｅ?ＰＣＲ?ｏｆ?ｃＤＮＡ?（Ｍ：ｍａｒｋｅｒ?ＤＬ２０００）??將上述ＰＣＲ產(chǎn)物連接到ｐＭＤ１９－Ｔ，挑取單克隆進(jìn)行菌落ＰＣＲ和測(cè)序驗(yàn)證，??

圖５ｃＤＮＡ擴(kuò)增圖??Ｆｉｇｕｒｅｓ?ｔｈｅ?ＰＣＲ?ｏｆ?ｃＤＮＡ?（Ｍ：ｍａｒｋｅｒ?ＤＬ２０００）??述ＰＣＲ產(chǎn)物連接到ｐＭＤ１９－Ｔ，挑取單克隆進(jìn)行菌落ＰＣＲ和測(cè)利用ｆｅｃｐＪ－Ｆ和ｉ＾ｅｃｐＪ－Ｒ引物能夠從板栗疫菌中獲得長(zhǎng)度為６１８ｂ結(jié)果為；??ＡＴＧＧＣＣＡＡＣＣＣＴ....

本文編號(hào)：3934850