【目的】?jī)?nèi)根-貝殼杉烯氧化酶(KO)是赤霉素(GAs)生物合成途徑關(guān)鍵酶,也是植物GAs生物合成抑制劑多效唑的靶酶,若GAs生物合成途徑中在KO基因位點(diǎn)發(fā)生阻塞,會(huì)影響植株的正常生長(zhǎng)。本研究克隆山核桃CcKO基因(Caca0733S0131)及其啟動(dòng)子并進(jìn)行表達(dá)分析,以利于進(jìn)一步探究山核桃CcKO基因在植物生長(zhǎng)和發(fā)育過程中,尤其是與株高調(diào)控相關(guān)的生物學(xué)功能,從而助力山核桃優(yōu)新種質(zhì)的創(chuàng)制�！痉椒ā恳陨胶颂殷w細(xì)胞胚為試驗(yàn)材料,采用同源重組及PCR擴(kuò)增技術(shù),克隆獲得山核桃KO的基因及啟動(dòng)子序列,并進(jìn)一步構(gòu)建了具有強(qiáng)啟動(dòng)子的35S∷CcKO∷GFP過表達(dá)載體和CcKOpro∷GUS啟動(dòng)子表達(dá)載體;利用BLAST在線工具得到該基因編碼的氨基酸序列,并對(duì)其進(jìn)行生物信息學(xué)分析和同源性分析;進(jìn)一步通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將啟動(dòng)子表達(dá)載體及過表達(dá)載體轉(zhuǎn)入核桃體細(xì)胞胚并進(jìn)行植株再生試驗(yàn),分別獲得陽性再生植株,從而深入分析山核桃CcKO基因的生物學(xué)功能�！窘Y(jié)果】通過克隆,獲得1條山核桃CcKO開放閱讀框,其全長(zhǎng)為1 563 bp,共編碼520個(gè)氨基酸,相對(duì)分子量為59.076 kDa。氨基酸同源性分析表明,山核桃C...

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【部分圖文】：

圖1CcKO的核苷酸序列及推導(dǎo)的氨基酸序列

BLAST比對(duì)發(fā)現(xiàn)山核桃CcKO基因?qū)儆诩?xì)胞色素超家族P450系。山核桃CcKO基因編碼的氨基酸序列與核桃JrKO氨基酸(NW＿017443530.1)同源性為96%，與歐洲栓皮櫟(Quercussuber)KO(NW＿019812880.1)的同源性為79%，與板栗(....

圖2不同物種KO氨基酸序列同源性比較

將克隆的山核桃CcKO基因推導(dǎo)的氨基酸序列與GenBank中已報(bào)道的其他物種的KO氨基酸序列進(jìn)行同源性比對(duì)(圖2)，結(jié)果表明，山核桃CcKO具有真核生物CYP450的氧化還原位點(diǎn)PERF、底物結(jié)合域ETLR，以及距離羧基端52—61位氨基酸的血紅素結(jié)合域FGGGKRVCAG....

圖3核桃CcKOpro∷GUS陽性體胚及再生植株的GUS定位分析

選取生長(zhǎng)健壯的核桃體胚進(jìn)行遺傳轉(zhuǎn)化(該體胚記為E0代體胚，E0表面產(chǎn)生的新體胚記為E1代體胚，以此類推)，用制備好的CcKOpro∷GUS啟動(dòng)子表達(dá)載體的農(nóng)桿菌菌液進(jìn)行侵染，培養(yǎng)至E1、E2、E3代分別進(jìn)行GUS染色。研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，GUS染液浸染8h后部分轉(zhuǎn)化體胚呈現(xiàn)明亮的藍(lán)色....

圖4核桃CcKOpro∷GUS陽性體胚及再生植株的PCR鑒定

圖3核桃CcKOpro∷GUS陽性體胚及再生植株的GUS定位分析2.3山核桃CcKO基因在核桃中的遺傳轉(zhuǎn)化及表達(dá)分析

本文編號(hào)：3932640