【目的】內根-貝殼杉烯氧化酶(KO)是赤霉素(GAs)生物合成途徑關鍵酶,也是植物GAs生物合成抑制劑多效唑的靶酶,若GAs生物合成途徑中在KO基因位點發(fā)生阻塞,會影響植株的正常生長。本研究克隆山核桃CcKO基因(Caca0733S0131)及其啟動子并進行表達分析,以利于進一步探究山核桃CcKO基因在植物生長和發(fā)育過程中,尤其是與株高調控相關的生物學功能,從而助力山核桃優(yōu)新種質的創(chuàng)制。【方法】以山核桃體細胞胚為試驗材料,采用同源重組及PCR擴增技術,克隆獲得山核桃KO的基因及啟動子序列,并進一步構建了具有強啟動子的35S∷CcKO∷GFP過表達載體和CcKOpro∷GUS啟動子表達載體;利用BLAST在線工具得到該基因編碼的氨基酸序列,并對其進行生物信息學分析和同源性分析;進一步通過農(nóng)桿菌介導法將啟動子表達載體及過表達載體轉入核桃體細胞胚并進行植株再生試驗,分別獲得陽性再生植株,從而深入分析山核桃CcKO基因的生物學功能�！窘Y果】通過克隆,獲得1條山核桃CcKO開放閱讀框,其全長為1 563 bp,共編碼520個氨基酸,相對分子量為59.076 kDa。氨基酸同源性分析表明,山核桃C...

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【部分圖文】：

圖1CcKO的核苷酸序列及推導的氨基酸序列

BLAST比對發(fā)現(xiàn)山核桃CcKO基因屬于細胞色素超家族P450系。山核桃CcKO基因編碼的氨基酸序列與核桃JrKO氨基酸(NW＿017443530.1)同源性為96%，與歐洲栓皮櫟(Quercussuber)KO(NW＿019812880.1)的同源性為79%，與板栗(....

圖2不同物種KO氨基酸序列同源性比較

將克隆的山核桃CcKO基因推導的氨基酸序列與GenBank中已報道的其他物種的KO氨基酸序列進行同源性比對(圖2)，結果表明，山核桃CcKO具有真核生物CYP450的氧化還原位點PERF、底物結合域ETLR，以及距離羧基端52—61位氨基酸的血紅素結合域FGGGKRVCAG....

圖3核桃CcKOpro∷GUS陽性體胚及再生植株的GUS定位分析

選取生長健壯的核桃體胚進行遺傳轉化(該體胚記為E0代體胚，E0表面產(chǎn)生的新體胚記為E1代體胚，以此類推)，用制備好的CcKOpro∷GUS啟動子表達載體的農(nóng)桿菌菌液進行侵染，培養(yǎng)至E1、E2、E3代分別進行GUS染色。研究結果發(fā)現(xiàn)，GUS染液浸染8h后部分轉化體胚呈現(xiàn)明亮的藍色....

圖4核桃CcKOpro∷GUS陽性體胚及再生植株的PCR鑒定

圖3核桃CcKOpro∷GUS陽性體胚及再生植株的GUS定位分析2.3山核桃CcKO基因在核桃中的遺傳轉化及表達分析

本文編號：3932640