基于中華稻蝗轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)庫(kù),采用生物信息學(xué)方法搜索獲得1條OcKnk基因全長(zhǎng)cDNA序列,采用qRT-PCR檢測(cè)其組織部位表達(dá)特性和其在表皮發(fā)育過(guò)程中表達(dá)情況,明確其分子特性,采用RNAi技術(shù)結(jié)合表型觀察,研究其對(duì)中華稻蝗蛻皮和生長(zhǎng)發(fā)育的影響,以明確其生物學(xué)功能。組織部位表達(dá)結(jié)果顯示其在中華稻蝗體壁、前腸和脂肪體表達(dá)最高,發(fā)育表達(dá)結(jié)果顯示其在表皮不同發(fā)育日齡均有表達(dá),且在蛻皮前期和后期表達(dá)顯著高于其他日齡。生物學(xué)功能研究表明,注射dsRNA后,多數(shù)蟲(chóng)體難以成功蛻去舊表皮,導(dǎo)致死亡,少部分可蛻至下一齡期,但活動(dòng)力較低,行動(dòng)緩慢,最終死亡。研究結(jié)果表明OcKnk參與昆蟲(chóng)生長(zhǎng)發(fā)育和蛻皮過(guò)程,可作為重要靶標(biāo)基因,為下一步害蟲(chóng)防治提供理論基礎(chǔ)。

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圖1中華稻蝗OcKnk功能域分析

不同昆蟲(chóng)Knk氨基酸序列系統(tǒng)進(jìn)化分析結(jié)果顯示(圖2),不同昆蟲(chóng)Knk聚為一支,說(shuō)明不同昆蟲(chóng)Knk序列具有較高同源性,故將其命名為OcKnk。2.2OcKnk表達(dá)特性

圖2不同昆蟲(chóng)種類Knk聚類分析

將合成的dsGFP和dsOcKnk分別注射進(jìn)入稻蝗體內(nèi),24h后檢測(cè)其在對(duì)照組和處理組的表達(dá)情況(圖4a),結(jié)果顯示注射dsOcKnk后,與對(duì)照相比,OcKnk表達(dá)量顯著降低,dsOcKnk沉默效率為98.5%。表型觀察結(jié)果顯示(圖4b),注射dsOcKnk后,85%蟲(chóng)體在蛻皮....

圖3OcKnk在中華稻蝗5齡若蟲(chóng)中的表達(dá)模式

圖2不同昆蟲(chóng)種類Knk聚類分析圖4中華稻蝗dsOcKnk沉默效率和表型觀察

圖4中華稻蝗dsOcKnk沉默效率和表型觀察

圖3OcKnk在中華稻蝗5齡若蟲(chóng)中的表達(dá)模式3討論

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