標準物質(zhì)是轉(zhuǎn)基因生物安全監(jiān)管和檢驗檢測工作中進行質(zhì)量控制的關(guān)鍵。目前,國內(nèi)用于轉(zhuǎn)基因檢測的陽性對照資源匱乏,主要為基體標準物質(zhì),難以滿足轉(zhuǎn)基因生物安全監(jiān)管和檢測工作的需要。質(zhì)粒標準物質(zhì)作為轉(zhuǎn)基因檢測標準物質(zhì)新的發(fā)展方向,具有廣泛的應(yīng)用價值。本研究通過收集整理相關(guān)數(shù)據(jù)庫信息,獲得了國內(nèi)外19種主要轉(zhuǎn)基因水稻(Oryza sativa)品系的遺傳信息,全面分析其外源基因表達框中調(diào)控元件/基因的組成情況及使用頻率,并結(jié)合目前現(xiàn)有轉(zhuǎn)基因檢測技術(shù)標準,確定了以水稻內(nèi)標基因磷脂酶D基因(phospholipase D gene, PLD)、蔗糖磷酸合酶基因(sucrose phosphate synthase gene, SPS)和靶標基因CaMV35S啟動子(35S promoter from Cauliflower mosaicvirus, P_CaMV35S)、Ubiquitin啟動子(ubiquitin promoter from maize, P_Ubiquitin)、CaMV35S終止子、NOS終止子(terminator of nopaline...

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【部分圖文】：

圖2選用的7個篩查元件對19個水稻轉(zhuǎn)化體的覆蓋示意圖

將上述7個水稻篩查元件/基因(PCaMV35S,PUbiquitin,TNOS,TCaMV35S,Bar,HPT,Bt)和2個常用水稻內(nèi)標準基因(SPS和PLD)的檢測靶標序列按順序拼接成一段集成序列，序列總長3791bp，委托生工生物工程(上海)股份有限公司人工合成，并裝載....

圖3陽性質(zhì)粒分子pUC18-RICE-screen整合DNA序列

各篩查元件/基因目的條帶的清晰度隨pUC18-RICE-screen陽性質(zhì)粒濃度的遞減而減弱，各篩查元件/基因在質(zhì)粒濃度為1×102copies/μL及以上的樣品中均能被擴增，可滿足相應(yīng)篩查元件/基因定性PCR檢測的需求。此外，值得注意的是，受到pUC18-RICE-scr....

圖4陽性質(zhì)粒分子pUC18-RICE-screen的載體結(jié)構(gòu)圖

參考上述pUC18-RICE-screen質(zhì)粒普通PCR檢測的適宜質(zhì)粒濃度分析結(jié)果，選用6個濃度(1×106、1×105,1×104,1×103,1×102,10copies/μL)的pUC18-RICE-screen質(zhì)粒梯度稀釋液為DNA模板，進行qRT-PCR檢測。結(jié)....

圖5陽性質(zhì)粒分子pUC18-RICE-screen經(jīng)EcoRⅠ和PstⅠ雙酶切后的電泳

隨著質(zhì)粒標準分子概念的提出，近年來有關(guān)質(zhì)粒標準分子應(yīng)用于轉(zhuǎn)基因檢測的研究也逐漸增多。就水稻而言，汪小福等(2013)利用重疊PCR技術(shù)將PCaMV35S和TNOS等目標片段克隆構(gòu)建到載體pUC19中，獲得了轉(zhuǎn)基因水稻篩查的重組標準質(zhì)粒pUC-RS。同年，李曉飛等(2013)成功構(gòu)....

本文編號：3904639