背景:口腔鱗狀細(xì)胞癌是口腔頜面部發(fā)生率最高的惡性腫瘤,易發(fā)生復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移,預(yù)后較差。尋找特異性的生物標(biāo)志分子,進(jìn)行無創(chuàng)性的早期篩查或診斷工具的開發(fā),對改善口腔鱗癌患者預(yù)后差、存活率低、復(fù)發(fā)率高的現(xiàn)狀至關(guān)重要。近年來,關(guān)于外泌體的研究內(nèi)容不斷增加,研究思路不斷拓寬,其在人體多種疾病尤其是腫瘤發(fā)生、生長、轉(zhuǎn)移等方面的功能不斷被挖掘出來,外泌體已成為目前癌癥研究中的新方向及新熱點(diǎn)。目的:本研究旨在對口腔鱗癌細(xì)胞(Cal27)及口腔上皮細(xì)胞(Human oral epithelial cells,HOEC)來源的外泌體進(jìn)行分離鑒定及基因表達(dá)譜分析,為尋找與口腔鱗癌相關(guān)的特異性外泌體提供研究基礎(chǔ)。方法:采用超速離心法從細(xì)胞培養(yǎng)上清中分離外泌體,透射電鏡觀察其形貌特征,粒度儀分析其粒子直徑大小及分布情況,蛋白質(zhì)印記及流式細(xì)胞術(shù)檢測其標(biāo)志蛋白(ALIX、CD63、CD81)。利用高通量測序技術(shù)全面掌握兩種外泌體基因表達(dá)譜,篩選差異表達(dá)基因,并對差異基因進(jìn)行KEGG生物通路富集分析及GO基因功能富集分析。結(jié)果:1)Cal27及HOEC外泌體均呈圓形或橢圓形,直徑均分布在30-150nm區(qū)間,ALIX、C...

【文章頁數(shù)】：60 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖2-1透射電鏡觀察外泌體形態(tài)（25000）

圖2-1透射電鏡觀察外泌體形態(tài)（25000）2.3.2外泌體標(biāo)志蛋白檢測蛋白質(zhì)印記結(jié)果顯示，Cal27及HOEC來源的外泌體均表達(dá)ALIX蛋白（圖2-2）。利用流式細(xì)胞術(shù)在兩種外泌體中均檢測到CD63、CD81兩種蛋白的表達(dá)（圖2-3）。圖2-2蛋白質(zhì)....

圖2-2蛋白質(zhì)印記檢測ALIX標(biāo)志蛋白

Cal27及HOEC來源的外泌體均表達(dá)ALIX蛋白（圖2-2）。利用流式細(xì)胞術(shù)在兩種外泌體中均檢測到CD63、CD81兩種蛋白的表達(dá)（圖2-3）。圖2-2蛋白質(zhì)印記檢測ALIX標(biāo)志蛋白注：以Cal27及HOEC兩種細(xì)胞內(nèi)的ALIX蛋白作為陽性對....

圖2-3流式細(xì)胞術(shù)檢測CD63及CD81蛋白

圖2-3流式細(xì)胞術(shù)檢測CD63及CD81蛋白2.3.3外泌體粒徑檢測粒徑儀測定結(jié)果顯示:兩種外泌體粒徑大小較為集中,大多集中在30-150nm之間。顆粒直徑區(qū)間累積百分比顯示：在0-30nm，30-150nm和＞150nm三個(gè)區(qū)間內(nèi)，Cal27分別為0、....

圖2-4外泌體粒徑分布測定

圖2-4外泌體粒徑分布測定注：a.Cal27外泌體粒徑及分布圖，b.HOEC外泌體粒徑及分布圖。2.4討論外泌體是由細(xì)胞分泌的大小約30-150nm的納米級胞外囊泡。由于體積微小，外泌體能自由地穿過血管壁及細(xì)胞基質(zhì)并有效避免體內(nèi)單核巨噬細(xì)胞的吞噬，因此，其可以廣泛....

本文編號：3896604