為了研究甜菜M14品系BvM14-Tpx基因的抗氧化功能,本試驗以帶有野生白花甜菜第9號染色體的單體附加系M14品系為試驗材料,利用RACE技術(shù)獲得甜菜M14品系硫氧還蛋白過氧化物酶基因(BvM14-Tpx) cDNA全長,對其進(jìn)行生物信息學(xué)分析,利用Real-time PCR和半定量RT-PCR技術(shù)對該基因進(jìn)行組織特異性表達(dá)分析,在原核表達(dá)體系下進(jìn)行BvM14-Tpx基因應(yīng)答氧化脅迫研究。生物信息學(xué)分析結(jié)果表明,BvM14-Tpx基因cDNA全長為1044 bp,包含最大的ORF為489 bp,編碼162個氨基酸;含有過氧化物酶Ⅱ(PrxⅡ)型的保守結(jié)構(gòu)域;BvM14-Tpx蛋白與豌豆(Pisum sativum L.)和苜蓿(Medicago truncatula L.)中Tpx蛋白的親緣性較高。組織特異性表達(dá)分析結(jié)果表明,BvM14-Tpx基因在甜菜M14品系各組織表達(dá)量從高到低的順序是根、莖、葉、花。通過原核表達(dá)體系下BvM14-Tpx基因應(yīng)答氧化脅迫的研究,表明BvM14-Tpx基因能夠提高大腸桿菌對于環(huán)境中氧化脅迫的適應(yīng)能力,減輕H₂O₂

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【部分圖文】：

圖1甜菜M14品系花、葉、莖、根總RNA的1%瓊脂糖凝膠電泳圖

圖1結(jié)果表明，提取總RNA中28SrRNA、18SrRNA、5SrRNA條帶清晰，并且28SrRNA條帶的亮度約為18SrRNA條帶亮度的2倍。說明從甜菜M14品系中提取的總RNA質(zhì)量較好，具有較好的完整性，可進(jìn)行后續(xù)的反轉(zhuǎn)錄實驗。2.1.2甜菜M14品系B....

圖4BvM14-Tpx基因cDNA全長的1%瓊脂糖凝膠電泳圖

將3′RACE與5′RACE測序結(jié)果進(jìn)行拼接并設(shè)計引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增。BvM14-Tpx基因cDNA全長條帶大小1044bp與預(yù)期擴(kuò)增條帶大小一致，進(jìn)一步通過測序結(jié)果，表明成功擴(kuò)增獲得BvM14-Tpx基因cDNA全長（圖4）。2.2甜菜M14品系BvM14-Tpx....

圖5BvM14-Tpx基因cDNA全長的開放閱讀框分析

通過Real-timePCR技術(shù)測定甜菜M14品系BvM14-Tpx基因花、葉、莖、根各個組織器官表達(dá)量，表明BvM14-Tpx基因在不同組織中的表達(dá)量是根>莖>葉>花（圖8）。通過半定量RT-PCR技術(shù)對BvM14-Tpx基因進(jìn)行組織特異性表達(dá)分析，BvM14-Tpx....

圖6BvM14-Tpx蛋白多重序列比對

實驗組為轉(zhuǎn)BvM14-Tpx基因BL21(DE3)菌株，對照組為轉(zhuǎn)空載體的BL21(DE3)菌株。在37℃，180r/min條件下，實驗組菌株與對照組菌株的生長曲線一致。在3mmol/LH2O2處理條件下，兩者的細(xì)胞增長數(shù)出現(xiàn)較大的差異，實驗組比對照組的菌數(shù)多且進(jìn)入對數(shù)生....

本文編號：3893051