目的:探討PIM1基因沉默對(duì)人胃癌MKN-45細(xì)胞增殖和凋亡的影響。方法:設(shè)計(jì)2條針對(duì)PIM1 mRNA靶序列的干擾RNA正義鏈和反義鏈及陰性對(duì)照序列,構(gòu)建重組pSIREN-retroQ質(zhì)粒載體,并轉(zhuǎn)染胃癌MKN-45細(xì)胞。應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR和蛋白質(zhì)印跡法分別檢測(cè)PIM1在mRNA水平及蛋白水平的表達(dá)。CCK-8法檢測(cè)胃癌MKN-45細(xì)胞的增殖,流式細(xì)胞分析胃癌細(xì)胞的凋亡,蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)凋亡相關(guān)蛋白Caspase 3和Caspase 9的表達(dá)。結(jié)果:重組克隆通過(guò)PCR擴(kuò)增及測(cè)序,證明干擾序列插入正確。與正常對(duì)照組和陰性對(duì)照組相比,兩個(gè)RNA干擾組胃癌MKN-45細(xì)胞PIM1在mRNA及蛋白水平的表達(dá)量都顯著降低(P<0.05),細(xì)胞增殖能力下降(P<0.05)。此外,干擾組細(xì)胞凋亡明顯增多(P<0.01),Caspase 3和Caspase9蛋白表達(dá)上調(diào)(P<0.01)。結(jié)論:PIM1 siRNA能有效下調(diào)靶基因表達(dá),產(chǎn)生特異性基因沉默效應(yīng);PIM1基因沉默顯著抑制胃癌MKN-45細(xì)胞的增殖并促進(jìn)其凋亡。

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本文編號(hào)：3877907