目的:探討PIM1基因沉默對人胃癌MKN-45細胞增殖和凋亡的影響。方法:設計2條針對PIM1 mRNA靶序列的干擾RNA正義鏈和反義鏈及陰性對照序列,構建重組pSIREN-retroQ質粒載體,并轉染胃癌MKN-45細胞。應用實時熒光定量PCR和蛋白質印跡法分別檢測PIM1在mRNA水平及蛋白水平的表達。CCK-8法檢測胃癌MKN-45細胞的增殖,流式細胞分析胃癌細胞的凋亡,蛋白質印跡法檢測凋亡相關蛋白Caspase 3和Caspase 9的表達。結果:重組克隆通過PCR擴增及測序,證明干擾序列插入正確。與正常對照組和陰性對照組相比,兩個RNA干擾組胃癌MKN-45細胞PIM1在mRNA及蛋白水平的表達量都顯著降低(P<0.05),細胞增殖能力下降(P<0.05)。此外,干擾組細胞凋亡明顯增多(P<0.01),Caspase 3和Caspase9蛋白表達上調(P<0.01)。結論:PIM1 siRNA能有效下調靶基因表達,產(chǎn)生特異性基因沉默效應;PIM1基因沉默顯著抑制胃癌MKN-45細胞的增殖并促進其凋亡。

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