目的構(gòu)建小鼠過表達GJB1基因的重組腺相關(guān)病毒(rAAV)載體,建立一種小鼠腎臟過表達GJB1基因的動物模型。方法采用PCR擴增制備小鼠GJB1基因片段,利用基因重組技術(shù)構(gòu)建含GJB1基因的重組質(zhì)粒,將攜帶小鼠GJB1基因的腺相關(guān)病毒(AAV)穿梭質(zhì)粒與pAAV-RC、pHelper共轉(zhuǎn)染AAV-293細胞,通過選擇培養(yǎng)基篩選出同源重組的陽性克隆獲得rAAV。將30只成年C57BL/6J雄性小鼠隨機分為5組各6只(W1組、W2組、W3組、W4組及空白對照組),經(jīng)尾靜脈將rAAV注射到W1～W4組小鼠體內(nèi),分別于注射后1周、2周、3周、4周取其心臟、肝臟、腎臟組織行PCR檢測GJB1 mRNA的表達情況,并經(jīng)石蠟包埋切片后采用免疫組織化學法檢測Cx32的表達。結(jié)果含GJB1基因的rAAV被成功構(gòu)建。隨著注射后時間的延長,小鼠腎臟組織GJB1基因轉(zhuǎn)錄及Cx32蛋白表達強度均逐漸增強,與空白對照組比較差異有統(tǒng)計學意義(P均<0.05),而其他器官(肝臟、心臟)GJB1基因表達未見明顯增強(P均> 0.05)。結(jié)論采用rAAV技術(shù)可成功構(gòu)建腎臟過表達GJB1基因的小鼠模型,這對深入...

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【文章目錄】：
材料與方法
    一、材料
        1. 實驗動物
        2. 試劑及儀器
    二、方法
        1. r AAV的構(gòu)建與篩選
        2. GJB1基因過表達AAV載體轉(zhuǎn)染與篩選
        3. AAV病毒的濃縮及純化
        4. 超濾脫鹽及保存
        5. 動物實驗分組及處理
    三、統(tǒng)計學處理
結(jié)果
    一、GJB1基因r AAV的構(gòu)建
        1. GJB1基因的克隆合成
        2. GJB1基因r AAV載體構(gòu)建及測定結(jié)果
        3. GJB1基因r AAV包裝及濃度測定
    二、GJB1基因在小鼠腎臟表達明顯升高
討論



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