無脊椎動物先天免疫(Innate immunity)系統(tǒng)是通過機體內(nèi)的模式識別受體(Pattern Recognition Receptors,PRRs)識別入侵病原微生物表面的病原相關(guān)分子模式(Pathogen Associated Molecular Patterns,PAMPs)而激活的。而肽聚糖識別蛋白(Peptidoglycan recognition proteins,PGRPs)是一類在動物先天免疫系統(tǒng)中用來識別肽聚糖(PGN)的蛋白家族,在激活免疫途徑中起重要作用。本研究中我們以家蠅為研究對象,克隆了家蠅的PGRP-LE基因(MdPGRP-LE),對家蠅PGRP家族進行系統(tǒng)的生物信息學分析,并從分子水平上對MdPGRP-LE在家蠅先天免疫中的功能進行了研究。研究結(jié)果如下:1.我們篩選到26條MdPGRP基因,包括8條PGRP-L和18條PGRP-S。大多數(shù)PGRP-S都存在信號肽,除MdPGRP-LB有信號肽外,其它PGRP-L基因成員均無信號肽。此外,MdPGRP在家蠅基因組不同Scaffold上呈現(xiàn)不均勻分布。PGRP-L的外顯子數(shù)目普遍多于PGRP-S。2.對Md...

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【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第一章 前言
    1.1 肽聚糖識別蛋白(PGRP)的研究進展
    1.2 昆蟲的先天免疫系統(tǒng)
        1.2.1 昆蟲的免疫識別機制
        1.2.2 果蠅免疫信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑
        1.2.3 PPO(酚氧化酶原)激活途徑
    1.3 研究目的及意義
第二章 實驗材料與方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 實驗昆蟲
        2.1.2 菌種和載體
        2.1.3 實驗引物
    2.2 實驗方法
        2.2.1 家蠅PGRP家族生物信息學分析
        2.2.2 家蠅不同組織、發(fā)育階段和細菌刺激的表達模式
        2.2.3 家蠅幼蟲干擾效果檢測及干擾后功能分析
        2.2.4 MdPGRP-LE基因的原核表達及蛋白純化
        2.2.5 rMdPGRP-LE與細菌結(jié)合活性檢測
        2.2.6 rMdPGRP-LE與 PAMPs結(jié)合活性檢測
        2.2.7 rMdPGRP-LE與細菌凝集活性檢測
        2.2.8 rMdPGRP-LE與 PGN酰胺酶活性檢測
        2.2.9 rMdPGRP-LE抗菌活性檢測
第三章 實驗結(jié)果與分析
    3.1 家蠅PGRP家族生物信息學分析
        3.1.1 MdPGRP基因家族序列分析
        3.1.2 MdPGRP蛋白家族序列分析
    3.2 MdPGRP-LE基因在不同條件下的表達模式分析
        3.2.1 MdPGRP-LE基因在家蠅3 齡幼蟲不同組織中的表達水平
        3.2.2 MdPGRP-LE基因在家蠅不同發(fā)育階段的表達水平
        3.2.3 MdPGRP-LE基因在不同細菌刺激下的表達水平
    3.3 家蠅幼蟲干擾檢測及干擾后功能分析
        3.3.1 MdPGRP-LE基因干擾效果檢測
        3.3.2 MdPGRP-LE基因敲低后家蠅幼蟲腸道中pGFP-ECO的熒光檢測.
        3.3.3 MdPGRP-LE基因敲低對轉(zhuǎn)錄因子及抗菌肽表達的影響
        3.3.4 MdPGRP-LE基因敲低后酚氧化物酶活性的測定
        3.3.5 MdPGRP-LE基因敲低并細菌刺激對轉(zhuǎn)錄因子及抗菌肽表達的影響
        3.3.6 MdPGRP-LE基因敲低(并細菌刺激后)對家蠅幼蟲存活率的影響
    3.4 MdPGRP-LE基因的原核表達及蛋白純化
    3.5 rMdPGRP-LE與細菌結(jié)合活性檢測
    3.6 rMdPGRP-LE與多糖結(jié)合活性檢測
    3.7 rMdPGRP-LE與細菌凝集活性檢測
    3.8 rMdPGRP-LE酰胺酶活性檢測
    3.9 rMdPGRP-LE抗菌活性檢測
第四章 討論
第五章 結(jié)論與展望
    5.1 結(jié)論
    5.2 展望
參考文獻
致謝
碩士期間發(fā)表論文情況



本文編號：3867943