昆蟲(chóng)是地球上分布最廣、種類和數(shù)量最多的動(dòng)物。翅膀作為昆蟲(chóng)重要的結(jié)構(gòu)組成,除了飛行功能,還在求偶、保護(hù)蟲(chóng)卵不受外界傷害、辨別方向、相互交流、偽裝自己及警示天敵等方面發(fā)揮作用。完全變態(tài)昆蟲(chóng)在變態(tài)時(shí)要經(jīng)歷激烈的形態(tài)變化,包括幼蟲(chóng)期特異性組織退化、其他組織通過(guò)組織重建或者從成蟲(chóng)盤(Imaginal disc)分化產(chǎn)生。翅原基(Wing disc)也是由成蟲(chóng)盤分化而來(lái),形成于胚胎期。翅原基在幼蟲(chóng)前期發(fā)育緩慢,化蛹前快速發(fā)育,蛹期完成分化,形成成蟲(chóng)期的翅。翅是昆蟲(chóng)進(jìn)化過(guò)程中獨(dú)特的競(jìng)爭(zhēng)優(yōu)勢(shì),使得昆蟲(chóng)具備遷徙、轉(zhuǎn)移的能力。家蠶的翅膀由翅原基發(fā)育而來(lái),不同的家蠶品系的翅膀存在差異,迄今在家蠶中已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了雛翅、小翅、無(wú)翅、鰲蝦蛹等翅突變,并對(duì)部分突變基因進(jìn)行了深入的研究。為了鑒定家蠶雛翅相關(guān)的關(guān)鍵因子,我們選擇了p50和u11作為研究對(duì)象。p50是正常翅品系,來(lái)源于中國(guó)的廣東省,又名大造;u11是雛翅突變品系,是一種自然發(fā)生的隱性突變體。本研究利用高通量測(cè)序技術(shù)比較分析了這兩個(gè)不同翅型品種翅原基的轉(zhuǎn)錄組,并采用qRT-PCR技術(shù)進(jìn)行了驗(yàn)證,挖掘雛翅產(chǎn)生的相關(guān)基因,運(yùn)用CRISPR/Cas9系統(tǒng)介導(dǎo)的基因組...

【文章頁(yè)數(shù)】：69 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第1章 緒論
    1.1 昆蟲(chóng)翅發(fā)育基因的研究
        1.1.1 果蠅翅的研究
        1.1.2 蝴蝶翅的研究
        1.1.3 其他昆蟲(chóng)翅發(fā)育研究
    1.2 家蠶翅相關(guān)研究
        1.2.1 家蠶翅的多種組學(xué)研究概述
        1.2.2 家蠶翅突變基因的研究
        1.2.3 分子生物學(xué)技術(shù)在翅膀性狀研究中的應(yīng)用
        1.2.4 家蠶基因定位
        1.2.5 昆蟲(chóng)翅膀性狀在轉(zhuǎn)錄組學(xué)水平上的研究
    1.3 基因組編輯技術(shù)
        1.3.1 CRISPR/Cas9系統(tǒng)
        1.3.2 CRISPR/Cas9系統(tǒng)的應(yīng)用
    1.4 本研究的主要內(nèi)容和意義
第2章 翅膀大小不同的兩種家蠶翅原基的轉(zhuǎn)錄組分析
    2.1 前言
    2.2 材料與試劑
        2.2.1 家蠶
        2.2.2 主要實(shí)驗(yàn)儀器和設(shè)備
        2.2.3 主要試劑
        2.2.4 常用溶液的配制
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和樣品準(zhǔn)備
        2.3.2 RNA提取和文庫(kù)構(gòu)建
        2.3.3 轉(zhuǎn)錄組測(cè)序和質(zhì)量控制
        2.3.4 轉(zhuǎn)錄組測(cè)序結(jié)果初步分析
        2.3.5 qRT-PCR驗(yàn)證
    2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.4.1 轉(zhuǎn)錄組測(cè)序結(jié)果的概述
        2.4.2 差異表達(dá)基因（DEGs）和GO富集分析
        2.4.3 差異表達(dá)基因（DEGs）和KEGG富集分析
        2.4.4 差異表達(dá)基因（DEGs）和qRT-PCR驗(yàn)證
        2.4.5 蛋白酶體通路和Hippo信號(hào)通路在p50中表達(dá)較活躍
        2.4.6 氨基糖和核苷酸糖代謝途徑在u11中表達(dá)較活躍
    2.5 討論
    2.6 結(jié)論
第3章 差異表達(dá)基因的功能驗(yàn)證
    3.1 前言
    3.2 實(shí)驗(yàn)材料、試劑和設(shè)備
        3.2.1 材料
        3.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器和試劑
    3.3 本實(shí)驗(yàn)技術(shù)路線
    3.4 實(shí)驗(yàn)方法
        3.4.1 靶點(diǎn)選擇與克隆測(cè)序引物設(shè)計(jì)
        3.4.2 家蠶基因組DNA的提取
        3.4.3 體外轉(zhuǎn)錄Cas9 mRNA
        3.4.4 sgRNA的合成
        3.4.5 Cas9-sgRNA的純化
        3.4.6 家蠶胚胎顯微注射
        3.4.7 基因組DNA提取以及突變檢測(cè)
    3.5 結(jié)果與分析
        3.5.1 轉(zhuǎn)基因家蠶的獲得
        3.5.2 BGIBMGA010794基因突變引起蠶蛾翅膀變小
        3.5.3 BGIBMGA010794基因靶點(diǎn)突變檢測(cè)
        3.5.4 BGIBMGA003335基因突變?cè)斐尚Q卵死亡未能孵化
    3.6 討論與展望
第4章 小翅關(guān)鍵基因的沉默分析
    4.1 引言
    4.2 實(shí)驗(yàn)材料、試劑、和設(shè)備
        4.2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.2.2 試劑和設(shè)備
    4.3 實(shí)驗(yàn)方法
        4.3.1 siRNA的設(shè)計(jì)
        4.3.2 siRNA的合成
        4.3.3 微量注射
        4.3.4 取材
        4.3.5 qRT-PCR驗(yàn)證
    4.4 結(jié)果與分析
        4.4.1 干擾后表型觀察
        4.4.2 基因沉默檢測(cè)
    4.5 討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文
致謝



本文編號(hào)：3867084