研究背景:健康牙齦結(jié)締組織主要通過非角化的結(jié)合上皮牢固地附著在牙齒硬組織上,封閉軟硬組織交界處,從而阻止病原體和刺激物滲透到下面的軟組織和骨組織。然而,臨床探診、牙周炎、牙周手術(shù)、正畸牽引等均會在一定程度上損傷破壞結(jié)合上皮,導(dǎo)致牙周附著喪失。結(jié)合上皮一側(cè)通過外基板與下方的結(jié)締組織相連接,另一側(cè)通過內(nèi)基板和半橋粒附著在牙齒上。內(nèi)基板的主要成分之一是層粘連蛋白332(Laminin 332,LM332),其中LM332的α3鏈(LAMA3)在調(diào)控上皮細胞的遷移、粘附以及半橋粒的形成中具有重要作用�；蛑委熓菑姆肿铀窖芯考膊〉男炉煼�,通過將外源正常基因?qū)氚屑毎麖亩_到治療目的,而腺病毒載體是目前基因治療最為常用的病毒載體之一。研究目的:本研究通過構(gòu)建過表達LAMA3基因的腺病毒載體,分別進行體內(nèi)、體外轉(zhuǎn)染實驗,探討其在牙周再附著形成中的作用,為結(jié)合上皮在創(chuàng)傷愈合過程中形成穩(wěn)固的整合提供科學合理的實驗依據(jù)。研究方法:本研究首先構(gòu)建LAMA3過表達腺病毒,通過轉(zhuǎn)染人永生化表皮細胞(Ha Ca T)摸索最適MOI值;然后通過細胞粘附、細胞劃痕、實時熒光定量PCR、Western Blot、免疫...

【文章頁數(shù)】：77 頁

【學位級別】：碩士

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引言
第一章 LAMA3過表達腺病毒的細胞生物學評價
    1.1 實驗材料與設(shè)備
        1.1.1 主要材料
        1.1.2 細胞
        1.1.3 主要試劑
        1.1.4 主要儀器
    1.2 實驗方法
        1.2.1 Ha Ca T細胞復(fù)蘇、傳代
        1.2.2 載LAMA3過表達腺病毒的構(gòu)建
        1.2.3 腺病毒最適感染復(fù)數(shù)測定
        1.2.4 細胞轉(zhuǎn)染步驟
        1.2.5 細胞活性檢測
        1.2.6 細胞早期粘附實驗
        1.2.7 細胞劃痕實驗
        1.2.8 實時熒光定量PCR(RT-PCR)
        1.2.9 Western Blot檢測相關(guān)蛋白表達
        1.2.10 免疫熒光檢測相關(guān)蛋白的表達
        1.2.11 透射電子顯微鏡檢測半橋粒結(jié)構(gòu)
        1.2.12 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析
    1.3 實驗結(jié)果
        1.3.1 腺病毒感染復(fù)數(shù)檢測
        1.3.2 轉(zhuǎn)染腺病毒后HaCaTs增殖活性情況
        1.3.3 細胞早期粘附及遷移情況
        1.3.4 PCR檢測目的基因及相關(guān)基因的表達
        1.3.5 WB法檢測相關(guān)蛋白的表達
        1.3.6 免疫熒光檢測相關(guān)蛋白的表達
        1.3.7 透射電鏡檢測HaCaT細胞半橋粒結(jié)構(gòu)
    1.4 討論
    1.5 小結(jié)
第二章 LAMA3過表達腺病毒在牙周再附著形成中的作用研究
    2.1 實驗材料和設(shè)備
        2.1.1 主要材料
        2.1.2 實驗動物
        2.1.3 主要試劑
        2.1.4 主要儀器
    2.2 實驗方法
        2.2.1 動物實驗
        2.2.2 樣本收集
        2.2.3 免疫形態(tài)學分析
        2.2.4 辣根過氧化物酶(HRP)浸潤試驗
        2.2.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析
    2.3 實驗結(jié)果
        2.3.1 組織學觀察
        2.3.2 HRP滲透性檢測結(jié)果
    2.4 討論
    2.5 小結(jié)
全文總結(jié)
參考文獻
綜述 牙周再附著過程中生物學封閉形成的研究進展
    參考文獻
個人簡歷及在讀期間所取得的科研成果



本文編號：3848892