本文關(guān)鍵詞：白菜型油菜種質(zhì)資源抗旱鑒定及相關(guān)基因篩選，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：為研究采集于青海省境內(nèi)不同生態(tài)環(huán)境下的白菜型油菜種質(zhì)資源的抗旱性差異,鑒定具有強(qiáng)抗旱性的優(yōu)異白菜型油菜種質(zhì),并針對(duì)具有強(qiáng)抗旱性的種質(zhì)資源進(jìn)行抗旱相關(guān)基因的篩選鑒定研究,本試驗(yàn)收集不同生態(tài)環(huán)境下的白菜型油菜種質(zhì)共35份,對(duì)其進(jìn)行抗旱性鑒定、抗旱相關(guān)片段的分離鑒定及表達(dá)分析,主要結(jié)果如下:1、萌發(fā)期抗旱性鑒定試驗(yàn)根據(jù)各試驗(yàn)指標(biāo)將35份白菜型油菜種質(zhì)資源進(jìn)行抗旱性排序后發(fā)現(xiàn),35份不同的白菜型油菜種質(zhì)資源的抗旱性存在一定差異;水培實(shí)驗(yàn)和苗期盆栽實(shí)驗(yàn)對(duì)抗旱較強(qiáng)的的種質(zhì)資源進(jìn)行進(jìn)一步PEG脅迫驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)表明,之前萌發(fā)期的抗旱鑒定真實(shí)有效,排名較前的的油菜品種在萌發(fā)期及苗期的抗旱性均強(qiáng)于其他種質(zhì)資源;2、抗旱相關(guān)片段的分離及鑒定研究表明,抗旱相關(guān)基因的表達(dá)決定著植物的抗旱性強(qiáng)弱。從抗旱性最強(qiáng)的種質(zhì)資源蠟燭油菜中篩選出干旱脅迫上調(diào)表達(dá)片段27個(gè),下調(diào)片段17個(gè)。其中27個(gè)上調(diào)表達(dá)片段中21個(gè)被成功克隆,21個(gè)片段中,20個(gè)片段均與蕓薹屬植物高度相似。3、表達(dá)分析以β-actin作為內(nèi)參基因,以前期篩選得到的X2-7片段序列設(shè)計(jì)引物,利用實(shí)時(shí)熒光半定量RT-PCR對(duì)31號(hào)蠟燭油菜中在20%濃度PEG脅迫下的子葉、葉、根和正常供水條件下的子葉、葉、根中X2-7基因片段的表達(dá)量進(jìn)行分析。結(jié)果表明,在正常生長(zhǎng)情況下X2-7基因片段在PEG脅迫下有一定量的表達(dá),干旱脅迫誘導(dǎo)后上調(diào)表達(dá),且在干旱脅迫的子葉中表達(dá)量較高。以上結(jié)果表明,X2-7基因片段受干旱脅迫的誘導(dǎo)而表達(dá),是白菜型油菜資源節(jié)水抗旱的相關(guān)基因。
【關(guān)鍵詞】：白菜型油菜種質(zhì) 資源抗旱性 基因篩選 cDNA-AFLP
【學(xué)位授予單位】：青海大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S565.4
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-9
• 第1章 文獻(xiàn)綜述9-19
• 1. 種質(zhì)資源研究10-14
• 1.1 種質(zhì)資源概念10
• 1.2 種質(zhì)資源的研究意義10-11
• 1.3 種質(zhì)資源的研究方法11-14
• 1.3.1 形態(tài)學(xué)水平11-12
• 1.3.2 染色體水平12
• 1.3.3 DNA分子水平12-14
• 2 抗旱性14-16
• 2.1 抗旱性概念14
• 2.2 抗旱性研究進(jìn)展14-16
• 3 基因分離鑒定研究進(jìn)展16
• 4 表達(dá)分析的研究進(jìn)展16-17
• 5 研究目的和意義17-19
• 第2章 白菜型油菜種質(zhì)資源萌發(fā)期抗旱性初步篩選研究19-26
• 1 材料與方法19-20
• 1.1 材料19-20
• 1.2 方法20
• 1.2.1 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)20
• 2 結(jié)果與分析20-24
• 2.1 調(diào)查指標(biāo)分析結(jié)果20-24
• 2.1.1 發(fā)芽率20-21
• 2.1.2 根長(zhǎng)21-22
• 2.1.3 芽長(zhǎng)22
• 2.1.4 確定最佳調(diào)查時(shí)間22
• 2.1.5 油菜種質(zhì)資源的抗旱性初步篩選22-24
• 3.討論24-26
• 第3章 白菜型油菜種質(zhì)資源的苗期水培抗旱驗(yàn)證研究26-33
• 1 材料與方法26-27
• 1.1 材料26
• 1.2 方法26-27
• 1.2.1 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)26-27
• 2 結(jié)果與分析27-32
• 2.1 PEG模擬干旱脅迫下的幼苗存活率及長(zhǎng)勢(shì)27-29
• 2.2 PEG模擬干旱脅迫下的根系形態(tài)29-32
• 3 討論32-33
• 第4章 白菜型油菜種質(zhì)資源苗期抗旱性驗(yàn)證研究33-36
• 1 材料與方法33
• 1.1 材料33
• 1.2 方法33
• 1.2.1 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)33
• 2 結(jié)果與分析33-34
• 3 討論34-36
• 第5章 白菜型油菜種質(zhì)資源抗旱相關(guān)基因的篩選36-46
• 1 材料與方法36-43
• 1.1 材料36-37
• 1.1.1 試驗(yàn)材料36
• 1.1.2 溶液配置36
• 1.1.3 主要儀器設(shè)備36-37
• 1.2 方法37-43
• 1.2.1 RNA提取37
• 1.2.2 DNA準(zhǔn)備37
• 1.2.3 DNA酶切37-38
• 1.2.4 連接接頭38-40
• 1.2.5 預(yù)擴(kuò)40-41
• 1.2.6 選擇性擴(kuò)增41-42
• 1.2.7 聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測(cè)42
• 1.2.8 染色42-43
• 1.2.9 拍照及統(tǒng)計(jì)43
• 2 結(jié)果與分析43-45
• 2.1 基因池的建立43-44
• 2.2 差異片段篩選44-45
• 3 討論45-46
• 第6章 白菜型油菜種質(zhì)資源抗旱相關(guān)基因的分離鑒定46-52
• 1 材料與方法46-48
• 1.1 材料46
• 1.2 方法46-48
• 1.2.1 差異片段的回收46
• 1.2.2 連接46
• 1.2.3 轉(zhuǎn)化46-47
• 1.2.4 克隆的鑒定與擴(kuò)大培養(yǎng)47-48
• 1.2.5 測(cè)序及BLAST比對(duì)48
• 2 結(jié)果與分析48-51
• 2.1 差異片段的回收48
• 2.2 目的基因的連接、轉(zhuǎn)化及克隆48-49
• 2.3 測(cè)序及BLAST比對(duì)49-51
• 3 討論51-52
• 第7章 白菜型油菜種質(zhì)資源抗旱相關(guān)基因的表達(dá)分析52-58
• 1 材料與方法52-54
• 1.1 材料52
• 1.2 方法52-54
• 1.2.1 RNA準(zhǔn)備52
• 1.2.2 引物的設(shè)計(jì)52
• 1.2.3 c DNA的合成52-53
• 1.2.4 普通PCR確定退火溫度53-54
• 1.2.5 半定量熒光PCR54
• 1.2.6 定量計(jì)算及統(tǒng)計(jì)分析54
• 2 結(jié)果與分析54-57
• 2.1 總RNA質(zhì)量檢測(cè)54-55
• 2.2 普通PCR設(shè)定退火溫度55
• 2.3 溶解曲線分析55-56
• 2.4 X2-7 基因片段的表達(dá)模式分析56-57
• 3 討論57-58
• 第8章 全文結(jié)論58-60
• 參考文獻(xiàn)60-66
• 致謝66-67
• 作者簡(jiǎn)介67

【相似文獻(xiàn)】

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