白菜型油菜種質(zhì)資源抗旱鑒定及相關(guān)基因篩選
本文關(guān)鍵詞:白菜型油菜種質(zhì)資源抗旱鑒定及相關(guān)基因篩選,由筆耕文化傳播整理發(fā)布。
【摘要】:為研究采集于青海省境內(nèi)不同生態(tài)環(huán)境下的白菜型油菜種質(zhì)資源的抗旱性差異,鑒定具有強抗旱性的優(yōu)異白菜型油菜種質(zhì),并針對具有強抗旱性的種質(zhì)資源進行抗旱相關(guān)基因的篩選鑒定研究,本試驗收集不同生態(tài)環(huán)境下的白菜型油菜種質(zhì)共35份,對其進行抗旱性鑒定、抗旱相關(guān)片段的分離鑒定及表達分析,主要結(jié)果如下:1、萌發(fā)期抗旱性鑒定試驗根據(jù)各試驗指標將35份白菜型油菜種質(zhì)資源進行抗旱性排序后發(fā)現(xiàn),35份不同的白菜型油菜種質(zhì)資源的抗旱性存在一定差異;水培實驗和苗期盆栽實驗對抗旱較強的的種質(zhì)資源進行進一步PEG脅迫驗證實驗表明,之前萌發(fā)期的抗旱鑒定真實有效,排名較前的的油菜品種在萌發(fā)期及苗期的抗旱性均強于其他種質(zhì)資源;2、抗旱相關(guān)片段的分離及鑒定研究表明,抗旱相關(guān)基因的表達決定著植物的抗旱性強弱。從抗旱性最強的種質(zhì)資源蠟燭油菜中篩選出干旱脅迫上調(diào)表達片段27個,下調(diào)片段17個。其中27個上調(diào)表達片段中21個被成功克隆,21個片段中,20個片段均與蕓薹屬植物高度相似。3、表達分析以β-actin作為內(nèi)參基因,以前期篩選得到的X2-7片段序列設(shè)計引物,利用實時熒光半定量RT-PCR對31號蠟燭油菜中在20%濃度PEG脅迫下的子葉、葉、根和正常供水條件下的子葉、葉、根中X2-7基因片段的表達量進行分析。結(jié)果表明,在正常生長情況下X2-7基因片段在PEG脅迫下有一定量的表達,干旱脅迫誘導(dǎo)后上調(diào)表達,且在干旱脅迫的子葉中表達量較高。以上結(jié)果表明,X2-7基因片段受干旱脅迫的誘導(dǎo)而表達,是白菜型油菜資源節(jié)水抗旱的相關(guān)基因。
【關(guān)鍵詞】:白菜型油菜種質(zhì) 資源抗旱性 基因篩選 cDNA-AFLP
【學位授予單位】:青海大學
【學位級別】:碩士
【學位授予年份】:2016
【分類號】:S565.4
【目錄】:
- 摘要4-5
- Abstract5-9
- 第1章 文獻綜述9-19
- 1. 種質(zhì)資源研究10-14
- 1.1 種質(zhì)資源概念10
- 1.2 種質(zhì)資源的研究意義10-11
- 1.3 種質(zhì)資源的研究方法11-14
- 1.3.1 形態(tài)學水平11-12
- 1.3.2 染色體水平12
- 1.3.3 DNA分子水平12-14
- 2 抗旱性14-16
- 2.1 抗旱性概念14
- 2.2 抗旱性研究進展14-16
- 3 基因分離鑒定研究進展16
- 4 表達分析的研究進展16-17
- 5 研究目的和意義17-19
- 第2章 白菜型油菜種質(zhì)資源萌發(fā)期抗旱性初步篩選研究19-26
- 1 材料與方法19-20
- 1.1 材料19-20
- 1.2 方法20
- 1.2.1 實驗設(shè)計20
- 2 結(jié)果與分析20-24
- 2.1 調(diào)查指標分析結(jié)果20-24
- 2.1.1 發(fā)芽率20-21
- 2.1.2 根長21-22
- 2.1.3 芽長22
- 2.1.4 確定最佳調(diào)查時間22
- 2.1.5 油菜種質(zhì)資源的抗旱性初步篩選22-24
- 3.討論24-26
- 第3章 白菜型油菜種質(zhì)資源的苗期水培抗旱驗證研究26-33
- 1 材料與方法26-27
- 1.1 材料26
- 1.2 方法26-27
- 1.2.1 實驗設(shè)計26-27
- 2 結(jié)果與分析27-32
- 2.1 PEG模擬干旱脅迫下的幼苗存活率及長勢27-29
- 2.2 PEG模擬干旱脅迫下的根系形態(tài)29-32
- 3 討論32-33
- 第4章 白菜型油菜種質(zhì)資源苗期抗旱性驗證研究33-36
- 1 材料與方法33
- 1.1 材料33
- 1.2 方法33
- 1.2.1 實驗設(shè)計33
- 2 結(jié)果與分析33-34
- 3 討論34-36
- 第5章 白菜型油菜種質(zhì)資源抗旱相關(guān)基因的篩選36-46
- 1 材料與方法36-43
- 1.1 材料36-37
- 1.1.1 試驗材料36
- 1.1.2 溶液配置36
- 1.1.3 主要儀器設(shè)備36-37
- 1.2 方法37-43
- 1.2.1 RNA提取37
- 1.2.2 DNA準備37
- 1.2.3 DNA酶切37-38
- 1.2.4 連接接頭38-40
- 1.2.5 預(yù)擴40-41
- 1.2.6 選擇性擴增41-42
- 1.2.7 聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測42
- 1.2.8 染色42-43
- 1.2.9 拍照及統(tǒng)計43
- 2 結(jié)果與分析43-45
- 2.1 基因池的建立43-44
- 2.2 差異片段篩選44-45
- 3 討論45-46
- 第6章 白菜型油菜種質(zhì)資源抗旱相關(guān)基因的分離鑒定46-52
- 1 材料與方法46-48
- 1.1 材料46
- 1.2 方法46-48
- 1.2.1 差異片段的回收46
- 1.2.2 連接46
- 1.2.3 轉(zhuǎn)化46-47
- 1.2.4 克隆的鑒定與擴大培養(yǎng)47-48
- 1.2.5 測序及BLAST比對48
- 2 結(jié)果與分析48-51
- 2.1 差異片段的回收48
- 2.2 目的基因的連接、轉(zhuǎn)化及克隆48-49
- 2.3 測序及BLAST比對49-51
- 3 討論51-52
- 第7章 白菜型油菜種質(zhì)資源抗旱相關(guān)基因的表達分析52-58
- 1 材料與方法52-54
- 1.1 材料52
- 1.2 方法52-54
- 1.2.1 RNA準備52
- 1.2.2 引物的設(shè)計52
- 1.2.3 c DNA的合成52-53
- 1.2.4 普通PCR確定退火溫度53-54
- 1.2.5 半定量熒光PCR54
- 1.2.6 定量計算及統(tǒng)計分析54
- 2 結(jié)果與分析54-57
- 2.1 總RNA質(zhì)量檢測54-55
- 2.2 普通PCR設(shè)定退火溫度55
- 2.3 溶解曲線分析55-56
- 2.4 X2-7 基因片段的表達模式分析56-57
- 3 討論57-58
- 第8章 全文結(jié)論58-60
- 參考文獻60-66
- 致謝66-67
- 作者簡介67
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