本研究前期通過(guò)雜交技術(shù)得到草魚(yú)、赤眼鱒正交F₁(♀)的回交子代并對(duì)其進(jìn)行形態(tài)學(xué)分析。分析結(jié)果顯示:回交子代的生長(zhǎng)性能顯著高于親本(P<0.05),回交子代與其親本具有相似的頭部的特征和眼睛顏色;回交子代與雙親的側(cè)線下鱗數(shù)存在顯著性差異(P<0.05),回交子代的超親本可量性狀占80.00%,我們有理由相信,其子代的生長(zhǎng)性狀差異與其遺傳物質(zhì)的變化有密切的聯(lián)系,因此我們?cè)O(shè)計(jì)了轉(zhuǎn)基因?qū)嶒?yàn)。轉(zhuǎn)基因?qū)嶒?yàn)通過(guò)分子重組及克隆技術(shù),將草魚(yú)(Ctenopharymgodon idellus)GH(Growth hormone)基因及鯉魚(yú)β肌動(dòng)蛋白基因啟動(dòng)子的序列克隆到經(jīng)酶切處理的轉(zhuǎn)座子供體質(zhì)粒(pTgf2-EFla-eGFP),構(gòu)成重組質(zhì)粒。將重組片段通過(guò)顯微注射技術(shù)導(dǎo)入赤眼鱒受精卵中,獲得轉(zhuǎn)基因赤眼鱒群體。本實(shí)驗(yàn)旨在為培育生長(zhǎng)迅速又有較強(qiáng)抗病性魚(yú)品種提供研究思路和材料。根據(jù)中科院水生所胡煒研究員提供的草魚(yú)GH基因表達(dá)載體質(zhì)粒pCAgcGH的全長(zhǎng)序列,設(shè)計(jì)一對(duì)帶有特異酶切位點(diǎn)的引物,采用PCR擴(kuò)增GH基因及鯉魚(yú)β肌動(dòng)蛋白基因啟動(dòng)子序列,再將其克隆到經(jīng)酶切處理的供體質(zhì)粒上...

【文章頁(yè)數(shù)】：55 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1 轉(zhuǎn)基因魚(yú)的研究概括
    2 魚(yú)類(lèi)GH基因轉(zhuǎn)導(dǎo)研究進(jìn)展
        2.1 魚(yú)類(lèi)生長(zhǎng)激素研究進(jìn)展
            2.1.1 魚(yú)類(lèi)生長(zhǎng)激素作用機(jī)理及功能
            2.1.2 魚(yú)類(lèi)生長(zhǎng)激素在水產(chǎn)養(yǎng)殖上的應(yīng)用
        2.2 魚(yú)類(lèi)生長(zhǎng)激素基因研究進(jìn)展
    3 魚(yú)類(lèi)遠(yuǎn)緣雜交在水產(chǎn)養(yǎng)殖上的應(yīng)用進(jìn)展
        3.1 魚(yú)類(lèi)遠(yuǎn)緣雜交的研究進(jìn)展
        3.2 遠(yuǎn)緣雜交在魚(yú)類(lèi)生長(zhǎng)、抗逆以及抗病等方面的應(yīng)用
            3.2.1 遠(yuǎn)緣雜交在魚(yú)類(lèi)生長(zhǎng)上的應(yīng)用
            3.2.2 遠(yuǎn)緣雜交在魚(yú)類(lèi)抗逆、抗病方面的應(yīng)用
        3.3 本團(tuán)隊(duì)已開(kāi)展的相關(guān)工作
    4 轉(zhuǎn)座子的研究進(jìn)展及基因轉(zhuǎn)導(dǎo)傳統(tǒng)方法
        4.1 金魚(yú)Tgf2的研究概述
        4.2 基因轉(zhuǎn)導(dǎo)的方法
    5 研究目的與意義
第二章 草魚(yú)、赤眼鱒正交F₁(♀)的回交子代形態(tài)分析
    1 材料與方法
        1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.2 實(shí)驗(yàn)方法
            1.2.1 外部形態(tài)觀察
            1.2.2 可數(shù)性狀
            1.2.3 可量性狀、框架性狀
        1.3 數(shù)據(jù)處理
    2 結(jié)果與分析
        2.1 外部形態(tài)觀察
        2.2 可數(shù)性狀分析
        2.3 可量性狀
            2.3.1 可量性狀分析
            2.3.2 形態(tài)比例分析
        2.4 框架性狀
    3 討論
        3.1 回交子代的雜種優(yōu)勢(shì)
        3.2 回交子代的形態(tài)差異分析
        3.3 回交子代的超親本性狀
    4 結(jié)論
第三章 目的基因(GH)的重組構(gòu)建
    1 材料與方法
        1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.2 實(shí)驗(yàn)方法
            1.2.1 目的基因的獲取
            1.2.2 轉(zhuǎn)座子供體質(zhì)粒pTgf2-EFla-eGFP的酶切
            1.2.3 感受態(tài)細(xì)胞的制備
            1.2.4 酶切產(chǎn)物與PCR產(chǎn)物連接與轉(zhuǎn)化
            1.2.5 重組質(zhì)粒pCAgcGH-Tgf2-L-R的酶切驗(yàn)證與測(cè)序
    2 結(jié)果與分析
        2.1 GH基因PCR擴(kuò)增結(jié)果
        2.2 轉(zhuǎn)座子供體質(zhì)粒pTgf2-EFla-eGFP的酶切結(jié)果
        2.3 連接與轉(zhuǎn)化結(jié)果
        2.4 重組質(zhì)粒的酶切驗(yàn)證
    3 討論
第四章 基因轉(zhuǎn)導(dǎo)及效果檢測(cè)
    1 材料與方法
        1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.2 主要儀器與試劑
            1.2.1 試劑
            1.2.2 主要儀器設(shè)備
        1.3 實(shí)驗(yàn)方法
            1.3.1 質(zhì)粒的大量制備
            1.3.2 顯微注射前的準(zhǔn)備
            1.3.3 顯微注射及胚胎培養(yǎng)
            1.3.4 DNA提取
            1.3.5 PCR陽(yáng)性檢測(cè)
            1.3.6 二次PCR陽(yáng)性檢測(cè)
            1.3.7 生長(zhǎng)速度比較分析
    2 結(jié)果與分析
        2.1 DNA提取結(jié)果
        2.2 二次PCR產(chǎn)物測(cè)序驗(yàn)證
        2.3 生長(zhǎng)速度比較結(jié)果分析
    3 討論與分析
第五章 問(wèn)題與展望
    1 結(jié)論
    2 問(wèn)題
    3 研究展望
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡(jiǎn)介



本文編號(hào)：3822402