研究背景:雄激素與前列腺癌的發(fā)生密切相關(guān),但其中機(jī)制尚不明確。成年男性隨著年齡的增長(zhǎng),其血清睪酮濃度的波動(dòng)趨勢(shì)也逐日增加。雄激素的不穩(wěn)定可能會(huì)導(dǎo)致相關(guān)細(xì)胞生長(zhǎng)信號(hào)通路的失調(diào),進(jìn)而影響DNA的復(fù)制過程。在外界因素和自身因素的作用下,DNA復(fù)制過程中堿基會(huì)有一定概率發(fā)生錯(cuò)誤配對(duì),錯(cuò)配修復(fù)(Mismatch repair,MMR)系統(tǒng)能夠通過迅速地識(shí)別錯(cuò)誤、限定切除和填補(bǔ)空缺,以保證遺傳信息的高保真度。前列腺癌的發(fā)生與MMR系統(tǒng)核心基因MLH1的表達(dá)和功能異常相關(guān)。因此,雄激素的變化可能對(duì)DNA損傷修復(fù)發(fā)揮重要影響,其中潛在機(jī)制尚不明確。目的:探討雙氫睪酮(Dihydrotestosterone,DHT)以及其濃度波動(dòng)對(duì)前列腺上皮細(xì)胞(RWPE-2細(xì)胞系)增殖能力以及細(xì)胞中錯(cuò)配修復(fù)相關(guān)蛋白MutL同源物(MLH1)表達(dá)的影響并初步闡釋產(chǎn)生其細(xì)胞生物學(xué)行為改變的潛在機(jī)制。方法:1.應(yīng)用梯度濃度的DHT(DHT濃度為0、1、10、50、100 nmol/L)處理RWPE-2細(xì)胞不同的時(shí)間(0、24、48、72h)后觀察比對(duì)細(xì)胞狀態(tài)的改變;應(yīng)用Western blot技術(shù)方法、實(shí)時(shí)熒光定量PCR技...

【文章頁(yè)數(shù)】：66 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
主要縮略語(yǔ)注釋表
第一章 緒論
    1.1 研究背景
    1.2 研究目的、內(nèi)容和技術(shù)路線
        1.2.1 目的
        1.2.2 內(nèi)容
        1.2.3 技術(shù)路線
第二章 雙氫睪酮濃度波動(dòng)對(duì)前列腺上皮細(xì)胞生物學(xué)行為的影響
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 主要試劑
        2.1.2 主要儀器及耗材
        2.1.3 主要試劑配制
    2.2 主要實(shí)驗(yàn)方法及步驟
        2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2.2 實(shí)驗(yàn)分組行形態(tài)學(xué)觀察
            2.2.2.1 篩選適宜DHT處理濃度
            2.2.2.2 設(shè)立實(shí)驗(yàn)分組,加入處理因素
        2.2.3 細(xì)胞增殖檢測(cè)-CCK-8 法
        2.2.4 WESTERN BLOT
        2.2.5 RT-qPCR
        2.2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 梯度濃度DHT對(duì) RWPE-2 細(xì)胞形態(tài)學(xué)的影響
        2.3.2 梯度濃度DHT對(duì) RWPE-2 細(xì)胞中MLH1 表達(dá)的影響
        2.3.3 波動(dòng)濃度DHT對(duì) RWPE-2 細(xì)胞形態(tài)學(xué)的影響
        2.3.4 波動(dòng)濃度DHT對(duì) RWPE-2 細(xì)胞增殖能力的影響
        2.3.5 波動(dòng)濃度DHT對(duì) RWPE-2 細(xì)胞中MLH1 表達(dá)的影響
    2.4 討論
第三章 雙氫睪酮波動(dòng)促進(jìn)RWPE-2 細(xì)胞增殖和MLH1 表達(dá)的機(jī)制研究
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 主要材料
        3.1.2 常用試劑的配制
    3.2 主要實(shí)驗(yàn)方法及步驟
        3.2.1 公共數(shù)據(jù)分析
        3.2.2 部分引物的設(shè)計(jì)
        3.2.3 免疫熒光
        3.2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 CHIPBase V2.0公共數(shù)據(jù)庫(kù)分析AR基因與MLH1基因在前列腺癌中表達(dá)的相關(guān)性
        3.3.2 DHT波動(dòng)干預(yù)RWPE-2 細(xì)胞后AR通路的變化
        3.3.3 DHT波動(dòng)干預(yù)RWPE-2 細(xì)胞后AKT通路的變化
            3.3.3.1 梯度濃度DHT處理RWPE-2 細(xì)胞后AKT通路的變化
            3.3.3.2 波動(dòng)濃度DHT處理RWPE-2 細(xì)胞后AKT通路的變化
    3.4 討論
        3.4.1 DHT波動(dòng)激活A(yù)R通路,促進(jìn)細(xì)胞增殖
        3.4.2 DHT波動(dòng)激活A(yù)KT通路,促進(jìn)細(xì)胞增殖,抑制凋亡
        3.4.3 AR和AKT信號(hào)通路協(xié)同促進(jìn)細(xì)胞增殖和MLH1 的表達(dá)
第四章 結(jié)論與展望
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
致謝
碩士期間發(fā)表論文



本文編號(hào)：3821402