發(fā)布時間：2023-05-21 20:30

　　研究背景:雄激素與前列腺癌的發(fā)生密切相關(guān),但其中機制尚不明確。成年男性隨著年齡的增長,其血清睪酮濃度的波動趨勢也逐日增加。雄激素的不穩(wěn)定可能會導(dǎo)致相關(guān)細胞生長信號通路的失調(diào),進而影響DNA的復(fù)制過程。在外界因素和自身因素的作用下,DNA復(fù)制過程中堿基會有一定概率發(fā)生錯誤配對,錯配修復(fù)(Mismatch repair,MMR)系統(tǒng)能夠通過迅速地識別錯誤、限定切除和填補空缺,以保證遺傳信息的高保真度。前列腺癌的發(fā)生與MMR系統(tǒng)核心基因MLH1的表達和功能異常相關(guān)。因此,雄激素的變化可能對DNA損傷修復(fù)發(fā)揮重要影響,其中潛在機制尚不明確。目的:探討雙氫睪酮(Dihydrotestosterone,DHT)以及其濃度波動對前列腺上皮細胞(RWPE-2細胞系)增殖能力以及細胞中錯配修復(fù)相關(guān)蛋白MutL同源物(MLH1)表達的影響并初步闡釋產(chǎn)生其細胞生物學(xué)行為改變的潛在機制。方法:1.應(yīng)用梯度濃度的DHT(DHT濃度為0、1、10、50、100 nmol/L)處理RWPE-2細胞不同的時間(0、24、48、72h)后觀察比對細胞狀態(tài)的改變;應(yīng)用Western blot技術(shù)方法、實時熒光定量PCR技...

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
主要縮略語注釋表
第一章 緒論
    1.1 研究背景
    1.2 研究目的、內(nèi)容和技術(shù)路線
        1.2.1 目的
        1.2.2 內(nèi)容
        1.2.3 技術(shù)路線
第二章 雙氫睪酮濃度波動對前列腺上皮細胞生物學(xué)行為的影響
    2.1 實驗材料
        2.1.1 主要試劑
        2.1.2 主要儀器及耗材
        2.1.3 主要試劑配制
    2.2 主要實驗方法及步驟
        2.2.1 細胞培養(yǎng)
        2.2.2 實驗分組行形態(tài)學(xué)觀察
            2.2.2.1 篩選適宜DHT處理濃度
            2.2.2.2 設(shè)立實驗分組,加入處理因素
        2.2.3 細胞增殖檢測-CCK-8 法
        2.2.4 WESTERN BLOT
        2.2.5 RT-qPCR
        2.2.6 統(tǒng)計學(xué)分析
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 梯度濃度DHT對 RWPE-2 細胞形態(tài)學(xué)的影響
        2.3.2 梯度濃度DHT對 RWPE-2 細胞中MLH1 表達的影響
        2.3.3 波動濃度DHT對 RWPE-2 細胞形態(tài)學(xué)的影響
        2.3.4 波動濃度DHT對 RWPE-2 細胞增殖能力的影響
        2.3.5 波動濃度DHT對 RWPE-2 細胞中MLH1 表達的影響
    2.4 討論
第三章 雙氫睪酮波動促進RWPE-2 細胞增殖和MLH1 表達的機制研究
    3.1 實驗材料
        3.1.1 主要材料
        3.1.2 常用試劑的配制
    3.2 主要實驗方法及步驟
        3.2.1 公共數(shù)據(jù)分析
        3.2.2 部分引物的設(shè)計
        3.2.3 免疫熒光
        3.2.4 統(tǒng)計學(xué)分析
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 CHIPBase V2.0公共數(shù)據(jù)庫分析AR基因與MLH1基因在前列腺癌中表達的相關(guān)性
        3.3.2 DHT波動干預(yù)RWPE-2 細胞后AR通路的變化
        3.3.3 DHT波動干預(yù)RWPE-2 細胞后AKT通路的變化
            3.3.3.1 梯度濃度DHT處理RWPE-2 細胞后AKT通路的變化
            3.3.3.2 波動濃度DHT處理RWPE-2 細胞后AKT通路的變化
    3.4 討論
        3.4.1 DHT波動激活A(yù)R通路,促進細胞增殖
        3.4.2 DHT波動激活A(yù)KT通路,促進細胞增殖,抑制凋亡
        3.4.3 AR和AKT信號通路協(xié)同促進細胞增殖和MLH1 的表達
第四章 結(jié)論與展望
參考文獻
綜述
    參考文獻
致謝
碩士期間發(fā)表論文



本文編號：3821402