【目的】海藻糖是昆蟲中的主要血糖物質(zhì),在昆蟲的發(fā)育及生理活動中發(fā)揮重要功能。其中,海藻糖轉(zhuǎn)運蛋白(Tret)在將海藻糖從其生成組織(例如脂肪體)運輸?shù)狡湎慕M織的過程中起著重要作用。本研究通過分析褐飛虱(Nilaparvata lugens)兩條Tret1的序列結(jié)構(gòu),進一步抑制Nl Tret1的表達,探討這兩個Nl Tret1在褐飛虱體內(nèi)的生物學(xué)功能。【方法】以褐飛虱兩條Tret1序列為研究對象,利用生物信息學(xué)技術(shù)分析其蛋白結(jié)構(gòu)以及與其他昆蟲之間的同源性。采用RNAi(RNA interference)技術(shù)將合成的外源ds RNA(double-stranded RNA)注射到實驗室飼養(yǎng)褐飛虱種群體內(nèi),抑制其體內(nèi)Nl Tret1的表達,分別在注射48 h后取材,抽取總RNA并用反轉(zhuǎn)錄試劑盒合成第一鏈c DNA,采用q RT-PCR(quantitative real-time PCR)技術(shù)檢測ds Nl Tret1的干擾效果以及RNAi后褐飛虱體內(nèi)海藻糖代謝通路中相關(guān)基因的表達,最后測定葡萄糖、海藻糖和糖原含量以及海藻糖酶活性�！窘Y(jié)果】生物信息學(xué)分析表明,Nl Tret1-like X...

【文章頁數(shù)】：11 頁

【文章目錄】：
0 引言
1 材料與方法
    1.1 Nl Tret1及蛋白序列分析
    1.2 供試昆蟲
    1.3 褐飛虱總RNA的抽提及第一鏈c DNA的合成
    1.4 ds RNA的合成
    1.5 褐飛虱的顯微注射
    1.6 RNAi后褐飛虱體內(nèi)海藻糖代謝通路相關(guān)基因表達量測定
    1.7 總糖原、海藻糖、葡萄糖含量以及海藻糖酶活性測定
    1.8 數(shù)據(jù)分析
2 結(jié)果
    2.1 Nl Tret1蛋白序列分析
    2.2 Nl Tret1系統(tǒng)進化樹
    2.3 RNAi后褐飛虱體內(nèi)兩個Nl Tret1的表達情況
    2.4 RNAi后褐飛虱體內(nèi)海藻糖代謝通路相關(guān)基因的表達情況
    2.5 RNAi后對褐飛虱體內(nèi)糖原、海藻糖和葡萄糖含量的影響
    2.6 RNAi后對褐飛虱體內(nèi)海藻糖酶活性的影響
3 討論
4 結(jié)論



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