sox基因家族是一系列與雄性哺乳動物Y染色體上性別決定基因sry(sex determination region of Y chromosome)高度同源的基因的統(tǒng)稱。迄今為止,在不同物種中已經發(fā)現(xiàn)了40余種sox基因,不同的sox基因在生物體中各自承擔著重要的調控角色,包括動物的性別決定與分化過程、早期胚胎發(fā)育、早期神經系統(tǒng)的發(fā)育、軟骨發(fā)育以及多種組織器官的形成。sox3是唯一一個定位在X染色體上的sox基因,不僅如此,sox3還是sox基因家族中與哺乳動物雄性性別決定基因sry同源性最高的一個,因此吸引著眾多研究者的目光。在小鼠中sox3被證實與性腺發(fā)育息息相關,與配子發(fā)生有著緊密的聯(lián)系,在魚類中sox3被證實與生殖細胞的發(fā)育有關,在恒河青鳉中是重要的雄性性別決定基因。但是諸多研究中sox3都沒有一個準確的表達模式。因此,發(fā)現(xiàn)和確定sox3基因的表達模式對進一步研究其功能是十分必要的。青鳉是小型淡水魚,其個體小、胚胎透明、繁殖快、基因組小,是研究發(fā)育生物學和細胞生物學優(yōu)秀的模式物種。青鳉是第一個發(fā)現(xiàn)雄性性別決定dmy基因的非哺乳動物,也是唯一一個擁有雌性性別決定基因foxl3的脊...

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【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 引言
    1.魚類性別決定相關基因的研究
        1.1 芳香化酶基因
        1.2 sox基因家族
        1.3 dmrt1 基因
        1.4 amh基因
        1.5 其他相關基因
    2.sox基因家族相關研究的概述
        2.1 sox基因家族及其分類
        2.2 sox基因的特點
            2.2.1 進化的保守性
            2.2.2 含有較少的內含子
            2.2.3 分散存在于基因中
            2.2.4 網絡調控系統(tǒng)
            2.2.5 功能的多樣性
        2.3 sox基因的功能
            2.3.1 早期胚胎發(fā)育
            2.3.2 性別決定和性別分化
            2.3.3 神經系統(tǒng)發(fā)育
            2.3.4 軟骨形成、血的形成和晶狀體發(fā)育
    3、sox3 基因的研究進展
        3.1 sox3 與性腺的發(fā)育
        3.2 sox3 與中樞神經系統(tǒng)的發(fā)育
        3.3 sox3 與下丘腦-垂體軸的形成
    4.miRNA-mRNA作用機制和研究方法
        4.1 miRNA的形成及作用機制
        4.2 與sox3 相互結合的miRNA基因預測和驗證
    5、本研究的目的和意義
第二章 青鳉sox3 基因克隆及表達模式分析
    1.實驗材料
        1.1 實驗動物
        1.2 實驗試劑
        1.3 儀器
    2.實驗方法
        2.1 總RNA的提取
        2.2 RNA反轉錄為cDNA
        2.3 引物設計
        2.4 RT-PCR擴增
        2.5 PCR產物回收
        2.6 PCR產物連接
        2.7 感受態(tài)大腸桿菌制備
        2.8 轉化
        2.9 質粒小提
        2.10 序列比對、系統(tǒng)發(fā)育和染色體位置分析
        2.11 原位雜交
            2.11.1 探針體外合成
            2.11.2 冰凍切片
            2.11.3 化學原位雜交
            2.11.4 胚胎化學原位雜交
            2.11.5 雙色熒光原位雜交
    3.結果
        3.1 RNA質量檢測
        3.2 sox3 基因編碼區(qū)的鑒定
        3.3 青鳉sox3 序列分析
            3.3.1 多序列比對分析
            3.3.2 同源性分析
            3.3.3 系統(tǒng)發(fā)育分析
            3.3.4 染色體線性關系分析
        3.4 RT-PCR分析sox3 在青鳉成魚組織和胚胎中的表達
        3.5 化學原位雜交檢測sox3 RNA在青鳉性腺中的時空表達
        3.6 熒光雙色原位雜交對sox3 在卵巢中進行亞細胞定位
        3.7 熒光雙色原位雜交對sox3 在精巢中進行亞細胞定位
        3.8 整體胚胎化學原位雜交探究sox3 在胚胎發(fā)育過程中的表達
    4.討論
        4.1 生物信息學分析
        4.2 RT-PCR分析
        4.3 sox3 在青鳉卵巢的表達
        4.4 sox3 在青鳉精巢中的表達
        4.5 sox3 在青鳉胚胎中的表達
第三章 以青鳉sox3為靶基因的miRNA初步驗證
    1.實驗材料
        1.1 實驗動物
        1.2 實驗試劑
        1.3 實驗儀器
    2.實驗方法
        2.1 質粒構建
            2.1.1 目的片段獲取
            2.1.2 重組質粒骨架的構建
            2.1.3 重組質粒的獲取
        2.2細胞實驗
            2.2.1 細胞復蘇及傳代
            2.2.2 細胞轉染
        2.3 熒光素酶報告
    3.結果
        3.1 sox3靶miRNA的預測及選擇
        3.2 質粒圖譜
        3.3 質粒驗證
        3.4 轉染效率驗證
        3.5 熒光素酶報告結果
    4.討論
小結
參考文獻
碩士期間發(fā)表的文章
致謝



本文編號：3815854