sox基因家族是一系列與雄性哺乳動(dòng)物Y染色體上性別決定基因sry(sex determination region of Y chromosome)高度同源的基因的統(tǒng)稱。迄今為止,在不同物種中已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了40余種sox基因,不同的sox基因在生物體中各自承擔(dān)著重要的調(diào)控角色,包括動(dòng)物的性別決定與分化過程、早期胚胎發(fā)育、早期神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育、軟骨發(fā)育以及多種組織器官的形成。sox3是唯一一個(gè)定位在X染色體上的sox基因,不僅如此,sox3還是sox基因家族中與哺乳動(dòng)物雄性性別決定基因sry同源性最高的一個(gè),因此吸引著眾多研究者的目光。在小鼠中sox3被證實(shí)與性腺發(fā)育息息相關(guān),與配子發(fā)生有著緊密的聯(lián)系,在魚類中sox3被證實(shí)與生殖細(xì)胞的發(fā)育有關(guān),在恒河青鳉中是重要的雄性性別決定基因。但是諸多研究中sox3都沒有一個(gè)準(zhǔn)確的表達(dá)模式。因此,發(fā)現(xiàn)和確定sox3基因的表達(dá)模式對進(jìn)一步研究其功能是十分必要的。青鳉是小型淡水魚,其個(gè)體小、胚胎透明、繁殖快、基因組小,是研究發(fā)育生物學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)優(yōu)秀的模式物種。青鳉是第一個(gè)發(fā)現(xiàn)雄性性別決定dmy基因的非哺乳動(dòng)物,也是唯一一個(gè)擁有雌性性別決定基因foxl3的脊...

【文章頁數(shù)】：72 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 引言
    1.魚類性別決定相關(guān)基因的研究
        1.1 芳香化酶基因
        1.2 sox基因家族
        1.3 dmrt1 基因
        1.4 amh基因
        1.5 其他相關(guān)基因
    2.sox基因家族相關(guān)研究的概述
        2.1 sox基因家族及其分類
        2.2 sox基因的特點(diǎn)
            2.2.1 進(jìn)化的保守性
            2.2.2 含有較少的內(nèi)含子
            2.2.3 分散存在于基因中
            2.2.4 網(wǎng)絡(luò)調(diào)控系統(tǒng)
            2.2.5 功能的多樣性
        2.3 sox基因的功能
            2.3.1 早期胚胎發(fā)育
            2.3.2 性別決定和性別分化
            2.3.3 神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育
            2.3.4 軟骨形成、血的形成和晶狀體發(fā)育
    3、sox3 基因的研究進(jìn)展
        3.1 sox3 與性腺的發(fā)育
        3.2 sox3 與中樞神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育
        3.3 sox3 與下丘腦-垂體軸的形成
    4.miRNA-mRNA作用機(jī)制和研究方法
        4.1 miRNA的形成及作用機(jī)制
        4.2 與sox3 相互結(jié)合的miRNA基因預(yù)測和驗(yàn)證
    5、本研究的目的和意義
第二章 青鳉sox3 基因克隆及表達(dá)模式分析
    1.實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        1.3 儀器
    2.實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 總RNA的提取
        2.2 RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA
        2.3 引物設(shè)計(jì)
        2.4 RT-PCR擴(kuò)增
        2.5 PCR產(chǎn)物回收
        2.6 PCR產(chǎn)物連接
        2.7 感受態(tài)大腸桿菌制備
        2.8 轉(zhuǎn)化
        2.9 質(zhì)粒小提
        2.10 序列比對、系統(tǒng)發(fā)育和染色體位置分析
        2.11 原位雜交
            2.11.1 探針體外合成
            2.11.2 冰凍切片
            2.11.3 化學(xué)原位雜交
            2.11.4 胚胎化學(xué)原位雜交
            2.11.5 雙色熒光原位雜交
    3.結(jié)果
        3.1 RNA質(zhì)量檢測
        3.2 sox3 基因編碼區(qū)的鑒定
        3.3 青鳉sox3 序列分析
            3.3.1 多序列比對分析
            3.3.2 同源性分析
            3.3.3 系統(tǒng)發(fā)育分析
            3.3.4 染色體線性關(guān)系分析
        3.4 RT-PCR分析sox3 在青鳉成魚組織和胚胎中的表達(dá)
        3.5 化學(xué)原位雜交檢測sox3 RNA在青鳉性腺中的時(shí)空表達(dá)
        3.6 熒光雙色原位雜交對sox3 在卵巢中進(jìn)行亞細(xì)胞定位
        3.7 熒光雙色原位雜交對sox3 在精巢中進(jìn)行亞細(xì)胞定位
        3.8 整體胚胎化學(xué)原位雜交探究sox3 在胚胎發(fā)育過程中的表達(dá)
    4.討論
        4.1 生物信息學(xué)分析
        4.2 RT-PCR分析
        4.3 sox3 在青鳉卵巢的表達(dá)
        4.4 sox3 在青鳉精巢中的表達(dá)
        4.5 sox3 在青鳉胚胎中的表達(dá)
第三章 以青鳉sox3為靶基因的miRNA初步驗(yàn)證
    1.實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
    2.實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 質(zhì)粒構(gòu)建
            2.1.1 目的片段獲取
            2.1.2 重組質(zhì)粒骨架的構(gòu)建
            2.1.3 重組質(zhì)粒的獲取
        2.2細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
            2.2.1 細(xì)胞復(fù)蘇及傳代
            2.2.2 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
        2.3 熒光素酶報(bào)告
    3.結(jié)果
        3.1 sox3靶miRNA的預(yù)測及選擇
        3.2 質(zhì)粒圖譜
        3.3 質(zhì)粒驗(yàn)證
        3.4 轉(zhuǎn)染效率驗(yàn)證
        3.5 熒光素酶報(bào)告結(jié)果
    4.討論
小結(jié)
參考文獻(xiàn)
碩士期間發(fā)表的文章
致謝



本文編號(hào)：3815854