茶樹[Camellia sinensis(L.)O.Kuntze]起源于我國,在我國具有悠久的種植歷史,由其葉片加工成的“茶”飲品因其獨(dú)特的風(fēng)味,受到世界人民的喜愛。然而受到土壤鹽漬化影響,茶樹適宜生長的土壤環(huán)境受到破壞,限制了茶樹產(chǎn)量和品質(zhì)的提升。為闡明茶樹響應(yīng)鹽脅迫的分子基礎(chǔ)和調(diào)控機(jī)理,進(jìn)而為鑒定和選育茶樹抗鹽品種提供理論參考,本論文進(jìn)行了以下研究:1.從茶樹品種‘龍井長葉’中分離獲得了Na⁺/H⁺逆向轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因CsNHX6的cDNA全長,其包含一個(gè)1587 bp的ORF,編碼528個(gè)氨基酸。蛋白預(yù)測分析結(jié)果顯示CsNHX6蛋白包含11個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)域,主要定位于高爾基體中。系統(tǒng)進(jìn)化分析顯示,CsNHX6與葡萄VvNHX6、楊樹PtNHX2等同源性較高,聚為一支均屬于NHX Class-II亞家族成員,而與AtNHX1、AtNHX2等Class-I亞家族成員同源性較低。qRT-PCR分析表明,CsNHX6基因表達(dá)具有一定的組織特異性,在花器官中表達(dá)最高,而在莖中表達(dá)最低。200 mM Na⁺和100 mM K^...

【文章頁數(shù)】：64 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略詞表
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 鹽分對植物的危害
        1.1.1 滲透脅迫
        1.1.2 離子脅迫
        1.1.3 氧化脅迫
    1.2 植物對鹽脅迫的響應(yīng)機(jī)制
        1.2.1 滲透調(diào)節(jié)
        1.2.2 抗氧化系統(tǒng)
        1.2.3 維持Na⁺/K⁺平衡
        1.2.4 基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)
        1.2.5 MicroRNA在鹽脅迫中的作用
    1.3 茶樹耐鹽機(jī)制研究進(jìn)展
    1.4 研究的目的及意義
第二章 茶樹CsNHX6 基因的克隆及表達(dá)模式分析
    2.1 試驗(yàn)材料
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 菌株和載體
        2.1.3 試劑
        2.1.4 主要儀器設(shè)備
    2.2 試驗(yàn)方法
        2.2.1 植物材料培養(yǎng)與脅迫處理
        2.2.2 總RNA的提取
        2.2.3 cDNA第一鏈的合成
        2.2.4 茶樹CsNHX6 基因的克隆
        2.2.5 CsNHX6 基因序列的生物信息學(xué)分析
        2.2.6 實(shí)時(shí)熒光定量PCR
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 茶樹CsNHX6 基因的克隆
        2.3.2 茶樹CsNHX6 蛋白的生物信息學(xué)分析
        2.3.3 茶樹CsNHX6 基因表達(dá)模式分析
    2.4 討論
第三章 茶樹CsNHX6 基因在酵母中的功能驗(yàn)證
    3.1 試驗(yàn)材料
        3.1.1 載體和菌株
        3.1.2 試劑
        3.1.3 主要儀器設(shè)備
    3.2 試驗(yàn)方法
        3.2.1 酵母表達(dá)載體構(gòu)建
        3.2.2 酵母轉(zhuǎn)化
        3.2.3 酵母菌液PCR鑒定
        3.2.4 酵母功能互補(bǔ)
        3.2.5 酵母細(xì)胞離子含量檢測
        3.2.6 CsNHX6 蛋白關(guān)鍵氨基酸位點(diǎn)突變分析
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 酵母表達(dá)載體的構(gòu)建
        3.3.2 轉(zhuǎn)基因酵母檢測
        3.3.3 轉(zhuǎn)基因酵母功能回補(bǔ)分析
        3.3.4 轉(zhuǎn)基因酵母離子含量檢測
        3.3.5 pH對 CsNHX6 在酵母中回補(bǔ)功能的影響
        3.3.6 CsNHX6 定點(diǎn)突變及二級結(jié)構(gòu)預(yù)測
        3.3.7 CsNHX6 突變體的酵母功能回補(bǔ)分析
    3.4 討論
第四章 CsNHX6 基因在擬南芥中的遺傳轉(zhuǎn)化及功能驗(yàn)證
    4.1 試驗(yàn)材料
        4.1.1 植物材料
        4.1.2 載體與菌株
        4.1.3 試劑
        4.1.4 主要儀器
    4.2 試驗(yàn)方法
        4.2.1 擬南芥種植
        4.2.2 過表達(dá)載體構(gòu)
        4.2.3 農(nóng)桿菌感受態(tài)制備
        4.2.4 農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化
        4.2.5 擬南芥侵染
        4.2.6 轉(zhuǎn)基因陽性苗篩選
        4.2.7 轉(zhuǎn)基因擬南芥PCR鑒定
        4.2.8 轉(zhuǎn)基因擬南芥表達(dá)水平分析
        4.2.9 轉(zhuǎn)基因擬南芥耐鹽性功能驗(yàn)證
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 過表達(dá)載體構(gòu)建
        4.3.2 農(nóng)桿菌菌液PCR驗(yàn)證
        4.3.3 抗性植株的獲得與鑒定
        4.3.4 轉(zhuǎn)基因擬南芥表達(dá)水平分析
    4.4 討論
第五章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
個(gè)人簡歷



本文編號：3811557