目的:探討破骨分化過程中重要的兩個因子:巨噬細(xì)胞集落刺激因子(M-CSF)和核因子κB受體活化因子配體(RANKL)分別在骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)中過表達(dá)對破骨、成骨相關(guān)因子的影響。方法:全骨髓貼壁培養(yǎng)法體外培養(yǎng)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,分別構(gòu)建過表達(dá)質(zhì)粒載體上調(diào)M-CSF基因和RANKL基因的表達(dá)。使用增強型綠色熒光蛋白(EGFP)確定最佳轉(zhuǎn)染劑量,并將兩種質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞。用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)和蛋白印跡反應(yīng)(Western-blot)檢測破骨分化特異標(biāo)志物:M-CSF、RANKL、IL-1、IL-6、TNF-α以及成骨分化特異標(biāo)志物:ALP、BMP2、Runx2的mRNA表達(dá)水平和蛋白表達(dá)水平。結(jié)果:(1)流式鑒定BMSCs表面標(biāo)記物CD45、CD29、CD34陽性率分別為3.8%、94%、0.3%;(2)5μL/孔LTX^?為最佳轉(zhuǎn)染劑量;(3)重組過表達(dá)質(zhì)粒M-CSF、RANKL經(jīng)酶切證實二者均正確插入相應(yīng)多克隆區(qū)域;(4)RT-PCR和Western-blot結(jié)果顯示,M-CSF組:M-CSF、RANKL、IL-1、TN...

【文章頁數(shù)】：70 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
前言
研究內(nèi)容與方法
    1.實驗耗材與儀器
    2.試劑的配制
    3.內(nèi)容與方法
        3.1 大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng)
        3.2 質(zhì)粒載體的構(gòu)建
        3.3 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞
        3.4 RT-PCR檢測破骨及成骨基因m RNA表達(dá)
        3.5 Western-blot檢測破骨及成骨基因蛋白水平表達(dá)
    4.質(zhì)量控制
    5.統(tǒng)計方法
    6.技術(shù)路線圖
結(jié)果
討論
小結(jié)
致謝
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文
導(dǎo)師評閱表



本文編號：3798005