目的:探討p62基因缺失對人脂肪間充質干細胞(hADSCs)自噬活性的影響,闡明脂肪分化的分子機制。方法:應用Ⅰ型膠原酶消化法從人大腿皮下脂肪抽吸液中分離培養(yǎng)hADSCs,使用80μmol·L^-1油酸(OA)聯(lián)合地塞米松和胰島素對hADSCs進行成脂誘導;將hADSCs分為對照組和p62基因缺失組,p62基因缺失組hADSCs轉染p62 shRNA慢病毒載體,對照組hADSCs轉染hADSCs空載體。采用CCK-8實驗繪制2組細胞的生長曲線并觀察細胞增殖活性變化;應用尼羅紅染色觀察脂滴的形成(尼羅紅脂滴染色陽性細胞數(shù)),Western blotting法檢測成脂標志轉錄因子C/EBPα和微管相關蛋白1輕鏈3Ⅱ型/微管相關蛋白1輕鏈3Ⅰ型(LC3Ⅱ/LC3Ⅰ)蛋白表達,磺酰成二胺(MDC)染色檢測2組細胞成脂中的自噬活性(MDC染色陽性細胞數(shù)),采用LC3與Mitotracker Red熒光共定位檢測2組細胞的線粒體自噬活性,使用環(huán)孢菌素A (CsA)分別抑制2組細胞線粒體自噬活性并進行成脂誘導,光鏡下計數(shù)含脂滴細胞數(shù)。結果:分離培養(yǎng)的細胞呈多角形或梭形,傳代后細胞...

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