本試驗(yàn)旨在克隆A型流感病毒H7N9株的PA和PAX基因并構(gòu)建真核表達(dá)載體對(duì)其進(jìn)行真核表達(dá)。從蘇州分離株的雞胚尿囊液中提取禽流感病毒RNA,通過(guò)RT-PCR技術(shù)獲取PA以及PAX全長(zhǎng)基因,經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳獲得純化的目的基因;構(gòu)建目的基因重組真核表達(dá)質(zhì)粒,并利用雙酶切及測(cè)序鑒定重組質(zhì)粒;質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞真核表達(dá),讓其表達(dá)的蛋白產(chǎn)物通過(guò)Western Blot鑒定。其結(jié)果成功地在293T細(xì)胞內(nèi)表達(dá)了PA與PAX蛋白,為進(jìn)一步研究A型流感病毒PA與PAX蛋白的功能奠定了基礎(chǔ)。

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 病毒毒株、質(zhì)粒及細(xì)胞
    1.2 主要試劑
    1.3 引物設(shè)計(jì)
    1.4 總R NA提取和R T-PCR擴(kuò)增
    1.5 PA基因和PAX基因重組克隆質(zhì)粒的構(gòu)建
    1.6 真核表達(dá)載體的構(gòu)建
    1.7 基因轉(zhuǎn)染
    1.8 Western Blot鑒定
2 結(jié)果
    2.1 R T-PCR瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果
    2.2 酶切鑒定H7N9毒株P(guān)A基因與PAX基因
    2.3 Western Blot蛋白鑒定
3 討論



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