本試驗旨在克隆A型流感病毒H7N9株的PA和PAX基因并構(gòu)建真核表達載體對其進行真核表達。從蘇州分離株的雞胚尿囊液中提取禽流感病毒RNA,通過RT-PCR技術(shù)獲取PA以及PAX全長基因,經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳獲得純化的目的基因;構(gòu)建目的基因重組真核表達質(zhì)粒,并利用雙酶切及測序鑒定重組質(zhì)粒;質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染293T細胞真核表達,讓其表達的蛋白產(chǎn)物通過Western Blot鑒定。其結(jié)果成功地在293T細胞內(nèi)表達了PA與PAX蛋白,為進一步研究A型流感病毒PA與PAX蛋白的功能奠定了基礎(chǔ)。

【文章頁數(shù)】：3 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 病毒毒株、質(zhì)粒及細胞
    1.2 主要試劑
    1.3 引物設(shè)計
    1.4 總R NA提取和R T-PCR擴增
    1.5 PA基因和PAX基因重組克隆質(zhì)粒的構(gòu)建
    1.6 真核表達載體的構(gòu)建
    1.7 基因轉(zhuǎn)染
    1.8 Western Blot鑒定
2 結(jié)果
    2.1 R T-PCR瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果
    2.2 酶切鑒定H7N9毒株P(guān)A基因與PAX基因
    2.3 Western Blot蛋白鑒定
3 討論



本文編號：3790717