腫瘤是基因的體細(xì)胞突變的累積導(dǎo)致的。新生抗原肽是由這些突變?cè)斐傻陌被嵝蛄凶兓牡鞍踪|(zhì)在一系列生化反應(yīng)后被MHC-Ⅰ分子遞呈的一段含有突變氨基酸的多肽。新生抗原肽只表達(dá)于腫瘤細(xì)胞表面,并且不受免疫耐受的影響,這使其成為免疫治療的理想靶點(diǎn)。本文結(jié)合質(zhì)譜和新一代高通量測(cè)序技術(shù),利用免疫沉淀和蛋白提取兩種策略嘗試從人腫瘤細(xì)胞系和實(shí)體瘤組織中發(fā)現(xiàn)新生抗原肽。免疫沉淀非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系NCI-H460總共鑒定到758條不同的遞呈肽,并鑒定到一條癌胚抗原肽EVSEPSMLQK。我們合成了包括癌胚抗原肽的4條多肽進(jìn)行驗(yàn)證,進(jìn)一步增加了鑒定到的多肽的可信度。但是,通過(guò)免疫沉淀的方式,我們未能從細(xì)胞系或是人腫瘤組織中鑒定到新生抗原肽。蛋白提取的結(jié)果顯示甲醇/氯仿提取后Trypsin酶解適用于發(fā)現(xiàn)腫瘤組織或腫瘤細(xì)胞系中由點(diǎn)突變形成的新生抗原。TritonX-114的提取方式可以對(duì)甲醇/氯仿的結(jié)果進(jìn)行擴(kuò)充。在不同腫瘤組織的實(shí)驗(yàn)證實(shí)了這兩種提取方法的可行性。我們合成驗(yàn)證了其中一條突變多肽,并結(jié)合預(yù)測(cè)得到一條新生抗原肽KAYHEQLSV。因此,質(zhì)譜鑒定得到的新生抗原,可優(yōu)先進(jìn)行新生抗原肽的預(yù)測(cè)和免疫原性的檢測(cè)。...

【文章頁(yè)數(shù)】：117 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
致謝
中文摘要
Abstract
縮略詞
1 緒論
    1.1 癌癥治療
    1.2 主要組織相容性復(fù)合體蛋白
    1.3 新生抗原及遞呈原理
    1.4 質(zhì)譜在檢測(cè)新生抗原肽的應(yīng)用
    1.5 本研究的目的和內(nèi)容
    1.6 技術(shù)路線
2 腫瘤細(xì)胞系和組織的MHC-Ⅰ遞呈肽的探究
    2.1 前言
    2.2 實(shí)驗(yàn)儀器與材料
    2.3 實(shí)驗(yàn)步驟與方法
    2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    2.5 實(shí)驗(yàn)討論
    2.6 小結(jié)
3 腫瘤細(xì)胞系和組織的新生抗原的鑒定
    3.1 前言
    3.2 實(shí)驗(yàn)儀器與材料
    3.3 實(shí)驗(yàn)步驟與方法
    3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.5 小結(jié)
結(jié)論與展望
參考文獻(xiàn)
附錄
綜述
    參考文獻(xiàn)
作者簡(jiǎn)介



本文編號(hào)：3787366