研究背景:慢性腎臟疾病(CKD)是世界上影響人類健康的慢性病之一,目前對慢性腎臟病的診斷仍缺乏有效手段。近年來研究表明,尿液信使RNA(messenger RNA,mRNA)檢測可能成為CKD早期無創(chuàng)診斷的有效手段。我們通過生物信息學(xué)和基因表達(dá)芯片的篩查,發(fā)現(xiàn)了一系列可能的CKD相關(guān)尿液mRNA診斷標(biāo)志物。然而,既往基于SYBR兩步PCR檢測尿液mRNA的方法耗時耗力,限制了對候選標(biāo)志物大樣本的臨床驗證。本研究旨在構(gòu)建一種基于Taqman探針熒光定量PCR一步試劑盒,提高尿液mRNA標(biāo)志物的檢測效率、敏感性、特異性,并通過臨床樣本驗證和性能評價,構(gòu)建CKD尿液mRNA一步法檢測試劑盒,發(fā)現(xiàn)CKD新型診斷標(biāo)志物。方法:應(yīng)用生物信息學(xué)技術(shù)篩選CKD患者差異表達(dá)mRNA,從中選取三個mRNA基因,分別是PODXL、IL1RL1和CCL2。根據(jù)目的基因ID,在NCBI上下載PODXL、IL1RL1、CCL2、以及B2M(內(nèi)參基因)基因全序列,并構(gòu)建基于Taqman探針的CKD相關(guān)基因檢測熒光定量一步法試劑盒,對試劑盒進(jìn)行敏感性及重復(fù)性檢驗以檢測試劑盒性能。篩選符合條件的受試者,收集受試者尿液樣...

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
英文縮略詞表(符號、變量、縮略詞等)
前言
綜述
第一部分 基于生物信息學(xué)的慢性腎臟病差異表達(dá)mRNA篩選
    1.1 前言
    1.2 材料
    1.3 實驗方法
    1.4 結(jié)果
    1.5 結(jié)論
第二部分 構(gòu)建基于Taqman探針的CKD相關(guān)mRNA檢測熒光定量一步法試劑盒
    2.1 前言
    2.2 材料
    2.3 原理
    2.4 探針及引物設(shè)計
    2.5 試劑盒組分配置
    2.6 尿液樣本收集及處理
    2.7 實時定量PCR
    2.8 數(shù)據(jù)分析
    2.9 結(jié)果
    2.10 尿taqman探針一步法mRNA檢測診斷標(biāo)志物與傳統(tǒng)sybrgreen法 mRNA檢測技術(shù)優(yōu)勢比較
    2.11 結(jié)論
第三部分 CKD臨床樣本驗證及診斷標(biāo)志物效能分析
    3.1 前言
    3.2 篩選受試者并搜集臨床資料信息
    3.3 收集尿液樣本并理
    3.4 尿液候選mRNA標(biāo)志物測
    3.5 數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計學(xué)分析
    3.6 入選受試者臨床資料
    3.7 結(jié)果
    3.8 結(jié)論
討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡介



本文編號：3773752