根據(jù)CRISPR(clustered regularly interspaced short palindromic repeats)/Cas(CRISPR-associated)基因編輯技術(shù),設(shè)計(jì)AbPPO4特異性導(dǎo)向RNA,構(gòu)建雙孢蘑菇(Agaricus bisporus)基因編輯載體pAbGEB1-AbPPO4,再通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化雙孢蘑菇菌絲體建立基因編輯體系,觀察菌絲生長狀況。結(jié)果表明:獲得12株轉(zhuǎn)化子,1號和7號的菌絲體中存在潮霉素抗性基因,且AbPPO4基因的相對表達(dá)量較低,分別為0.28±0.04和0.47±0.02,與對照組相比,組間差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),說明1號和7號轉(zhuǎn)化子的菌絲體AbPPO4基因表達(dá)受到了抑制;與對照組相比,1號和7號轉(zhuǎn)化子的菌絲體中AbPPO4基因均發(fā)生了突變,1號和7號分別產(chǎn)生了4 bp和11 bp的堿基缺失,證明設(shè)計(jì)的CRISPR/Cas9系統(tǒng)在雙孢蘑菇內(nèi)對AbPPO4基因成功地進(jìn)行了編輯;同時(shí)發(fā)現(xiàn)AbPPO4基因突變后對雙孢蘑菇菌絲體的生長產(chǎn)生了不利影響。

【文章頁數(shù)】：7 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 菌株
    1.2 主要試劑和儀器
    1.3 引物設(shè)計(jì)
    1.4 pAbGEB1載體構(gòu)建
    1.5 pAbGEB1-AbPPO4載體構(gòu)建
    1.6 雙孢蘑菇菌絲體培養(yǎng)
    1.7 農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化
    1.8 AbPPO 4基因表達(dá)量測定
    1.9 菌絲體生長狀況觀察
    1.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
2 結(jié)果與分析
    2.1 基因編輯載體構(gòu)建
    2.2 雙孢蘑菇AbPPO 4基因突變轉(zhuǎn)化子的獲得
    2.3 AbPPO 4基因?qū)﹄p孢蘑菇菌絲體生長的影響
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