桃(Prunus persica(L.)Batsch)是起源于中國的多年生落葉喬木,在世界上種植面積廣泛。環(huán)境脅迫,尤其是低溫影響桃的分布、品質(zhì)和產(chǎn)量。河北省最北部是我國桃樹栽培的北方極限,該地區(qū)的桃樹樹體在自然條件下越冬,容易遭受低溫凍害。研究桃低溫脅迫相關(guān)基因,對培養(yǎng)抗寒性強(qiáng)的桃樹品種具有積極作用。RBD蛋白(RNA binding domain protein)是一種具有RRM(RNA recognition motif)結(jié)構(gòu)域的蛋白,能夠與rRNA前體結(jié)合,低溫下幫助23S rRNA正確剪切,使葉綠體內(nèi)翻譯機(jī)制正常進(jìn)行。ATP基因是編碼ATP合酶組成蛋白的一類基因,參與生物體內(nèi)的氧化磷酸化等途徑,與抗寒相關(guān)信號的調(diào)控有關(guān)。本研究以‘21世紀(jì)’桃為試驗材料,克隆桃核編碼基因ppRBD1的gDNA和cDNA序列以及4個線粒體ATP基因,并提交到NCBI數(shù)據(jù)庫。對克隆的基因序列進(jìn)行生物信息學(xué)分析。提取桃葉片RNA,進(jìn)行ppRBD1基因的表達(dá)分析。同時構(gòu)建PpRBD1::YFP瞬時表達(dá)載體,進(jìn)行亞細(xì)胞定位。并將ppRBD1基因在擬南芥中超表達(dá),進(jìn)行功能分析。結(jié)果表明:1.以‘21世紀(jì)’...

【文章頁數(shù)】：65 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
縮略詞
摘要
ABSTRACT
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 桃分子生物學(xué)研究進(jìn)展
    1.2 桃樹抗寒相關(guān)基因的研究進(jìn)展
        1.2.1 寒害對果樹的影響
        1.2.2 桃樹抗寒相關(guān)分子機(jī)制研究
    1.3 葉綠體與非生物脅迫
    1.4 線粒體與非生物脅迫
    1.5 RNA結(jié)合蛋白的研究進(jìn)展
        1.5.1 原核生物中的RNA結(jié)合蛋白
        1.5.2 真核生物中的RNA結(jié)合蛋白
    1.6 核糖體的生物合成
    1.7 基于熒光蛋白的亞細(xì)胞定位研究進(jìn)展
    1.8 本研究的目的及意義
第二章 材料和方法
    2.1 試驗材料
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 菌株和質(zhì)粒
        2.1.3 儀器和藥品
    2.2 試驗方法
        2.2.1 植物葉片DNA的提取
        2.2.2 植物葉片RNA的提取和cDNA的合成
        2.2.3 PpRBD1基因的生物信息學(xué)分析
        2.2.4 載體的構(gòu)建
        2.2.5 質(zhì)粒的提取
        2.2.6 原生質(zhì)體的制備和亞細(xì)胞定位
        2.2.7 植物的生長條件
        2.2.8 蘸花法侵染擬南芥
        2.2.9 擬南芥轉(zhuǎn)基因后代的表型篩選
        2.2.10 電導(dǎo)率的測定
第三章 結(jié)果與分析
    3.1 PpRBD1基因的克隆
    3.2 PpRBD1基因的特征分析
        3.2.1 PpRBD1基因的序列檢索
        3.2.2 物種內(nèi)保守性
        3.2.3 理化性質(zhì)分析
        3.2.4 啟動子預(yù)測分析
        3.2.5 保守結(jié)構(gòu)域預(yù)測分析
        3.2.6 三維結(jié)構(gòu)預(yù)測分析
        3.2.7 進(jìn)化分析
    3.3 PpRBD1基因的表達(dá)分析
    3.4 PpRBD1基因的亞細(xì)胞定位
        3.4.1 亞細(xì)胞定位預(yù)測分析
        3.4.2 玉米中PpRBD1::YFP融合蛋白的亞細(xì)胞定位
    3.5 PpRBD1基因功能分析
        3.5.1 擬南芥超表達(dá)PpRBD1基因株系的獲取
        3.5.2 擬南芥突變體的鑒定
        3.5.3 PpRBD1基因抗寒性鑒定
    3.6 四個ATP基因的克隆
    3.7 四個ATP基因的特征分析
        3.7.1 四個ATP基因的序列檢索
        3.7.2 理化性質(zhì)分析
        3.7.3 跨膜結(jié)構(gòu)分析
        3.7.4 保守結(jié)構(gòu)域預(yù)測分析
        3.7.5 三維結(jié)構(gòu)預(yù)測
        3.7.6 進(jìn)化分析
第四章 討論與結(jié)論
    4.1 討論
        4.1.1 PpRBD1基因在葉綠體中行使抗寒性功能
        4.1.2 線粒體中4個ATP基因的功能
    4.2 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
發(fā)表論文和參加科研情況說明
附錄
    附錄1 本論文使用的引物
    附錄2 電導(dǎo)率測定原始數(shù)據(jù)
    附錄3 四個ATP基因同源序列比對
    附錄4 14 個物種RBD1蛋白質(zhì)序列的保守性
    附錄5 啟動子預(yù)測
致謝



本文編號：3773609