為研究大豆中核糖體基因?qū)Υ蠖鼓偷土蛎{迫功能的調(diào)控作用,從科豐1號(hào)根中克隆1個(gè)大豆核糖體蛋白編碼基因GmRPL12。分析基因結(jié)構(gòu)和低硫脅迫下不同組織中的表達(dá)情況,將基因過(guò)表達(dá)載體和干擾載體轉(zhuǎn)化科豐1號(hào)毛狀根,獲得轉(zhuǎn)基因嵌合體,并進(jìn)行基因表達(dá)分析和植株表型分析。序列分析結(jié)果表明:基因編碼區(qū)全長(zhǎng)576 bp,預(yù)測(cè)蛋白C端包含1個(gè)核糖體蛋白L7/L12保守結(jié)構(gòu)域RPL12。該基因在根中表達(dá)量較高,表達(dá)水平受低硫誘導(dǎo),不同品種中該基因?qū)Φ土蝽憫?yīng)的模式不同。通過(guò)毛狀根遺傳轉(zhuǎn)化獲得GmRPL12基因過(guò)表達(dá)、RNA干擾以及空載體對(duì)照的大豆嵌合體。低硫處理與正常硫水平處理相比,GmRPL12基因過(guò)表達(dá)的大豆嵌合體植株倒一葉和倒二葉SPAD、株高、地上部鮮重和干重、地下部鮮重和干重顯著增加,RNA干擾下調(diào)大豆嵌合體植株的以上指標(biāo)。GmRPL12基因的過(guò)量表達(dá)能顯著增加低硫處理時(shí)地上部、地下部的無(wú)機(jī)硫含量,以及正常硫水平處理時(shí)地上部的無(wú)機(jī)硫含量。研究結(jié)果暗示GmRPL12基因可能參與大豆對(duì)低硫耐性和大豆硫代謝的調(diào)控。

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
    1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)
    1.3 方法
        1.3.1 大豆核酸提取及cDNA第一鏈的合成
        1.3.2 基因克隆
        1.3.3 生物信息學(xué)分析
        1.3.4 實(shí)時(shí)定量PCR
        1.3.5 過(guò)表達(dá)載體與干擾載體的構(gòu)建
        1.3.6 轉(zhuǎn)化毛狀根
        1.3.7 轉(zhuǎn)基因嵌合體表型指標(biāo)測(cè)定
    1.4 數(shù)據(jù)分析
2 結(jié)果與分析
    2.1 GmRPL12基因的克隆
    2.2 大豆GmRPL12基因的表達(dá)分析
        2.2.1 不同組織中GmRPL12基因的表達(dá)分析
        2.2.2 不同硫水平下GmRPL12基因表達(dá)分析
    2.3 轉(zhuǎn)基因嵌合體的低硫誘導(dǎo)分析
        2.3.1 不同硫水平下轉(zhuǎn)基因大豆嵌合體中GmRPL12基因表達(dá)分析
        2.3.2 不同硫水平下轉(zhuǎn)基因嵌合體的根量分析
        2.3.3 不同硫水平下轉(zhuǎn)基因嵌合體植株的SPAD和株高分析
        2.3.4 不同硫水平下轉(zhuǎn)基因嵌合體植株地上部和地下部鮮重、干重分析
        2.3.5 過(guò)表達(dá)GmRPL12基因嵌合體植株不同硫水平下植株無(wú)機(jī)硫含量
3 討 論
4 結(jié) 論



本文編號(hào)：3765950