禽致病性大腸桿菌是一種在家畜養(yǎng)殖業(yè)中最常見(jiàn)的致病菌,禽致病性大腸桿菌感染會(huì)使家禽死亡率增加,給養(yǎng)禽業(yè)帶來(lái)巨大的經(jīng)濟(jì)損失。已有轉(zhuǎn)錄組學(xué)實(shí)驗(yàn)證實(shí)了lsrR的敲除會(huì)影響到大腸桿菌100多個(gè)基因的轉(zhuǎn)錄水平,這涉及到了生物被膜形成、轉(zhuǎn)錄調(diào)控、壓力環(huán)境下的蛋白表達(dá)及營(yíng)養(yǎng)獲取等生理活動(dòng)。經(jīng)查找文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)MFS外排泵中的轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白MdtH對(duì)諾氟沙星具有抗性。此實(shí)驗(yàn)揭示了禽致病性大腸桿菌lsrR缺失對(duì)于耐藥基因mdtH的影響,進(jìn)而闡明了lsrR對(duì)耐藥基因mdtH的調(diào)控機(jī)制。1.用二倍稀釋法驗(yàn)證諾氟沙星,氧氟沙星,環(huán)丙沙星和四環(huán)素對(duì)WT(AEPC40)和XY10(AEPC40AlsrR)的耐藥程度。結(jié)果發(fā)現(xiàn),WT和XY10對(duì)四種抗生素的MIC值是一樣的。用CFU法檢驗(yàn)抗生素對(duì)WT和XY10耐藥性的影響,結(jié)果顯示四種抗生素對(duì)WT和XY10的影響趨勢(shì)是一致的,XY10的CFU值都比WT的CFU值高2倍以上。2.構(gòu)建lsrR和mdtH的過(guò)表達(dá)菌株,在四種抗生素壓力下,過(guò)表達(dá)菌株WT/pUClsrR 的 MIC 值與 WT/pUC19 和 XY10/pUC19 的 MIC 值相比降低了 8 倍,在四環(huán)素壓力下過(guò)表達(dá)菌...

【文章頁(yè)數(shù)】：66 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
致謝
摘要
ABSTRACT
英文縮寫(xiě)詞表
文獻(xiàn)綜述
    1 禽致病性大腸桿菌的研究背景
        1.1 大腸桿菌的概述
        1.2 APEC的致病機(jī)制
        1.3 APEC的毒力因子
        1.4 APEC的防治方法
    2 lsrR基因的研究進(jìn)展
        2.1 lsrR基因的研究背景
        2.2 群體感應(yīng)系統(tǒng)研究進(jìn)展
        2.3 具有Lsr系統(tǒng)的AI-2在細(xì)菌中的作用
    3 細(xì)菌的主要外排泵研究進(jìn)展
        3.1 細(xì)菌的主要外排泵的概述
        3.2 MFS外排泵的研究進(jìn)展
1 引言
    1.1 本課題研究的目的及意義
    1.2 國(guó)內(nèi)外研究進(jìn)展
    1.3 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容和方法
    1.4 主要技術(shù)路線
2 實(shí)驗(yàn)材料和方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)菌株
        2.1.2 主要試劑和試劑盒
        2.1.3 培養(yǎng)基和常用試劑的配制
        2.1.4 實(shí)驗(yàn)儀器
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 分子生物學(xué)法鑒定菌株
        2.2.2 APEC藥敏試驗(yàn)
        2.2.3 抗生素對(duì)APEC生長(zhǎng)的影響
        2.2.4 過(guò)表達(dá)菌株和回補(bǔ)菌株的表達(dá)
        2.2.5 生長(zhǎng)曲線的測(cè)定
        2.2.6 APEC總RNA的提取
        2.2.7 RT-qPCR檢測(cè)目的菌株中mdtH基因的轉(zhuǎn)錄水平
        2.2.8 LsrR蛋白純化表達(dá)
        2.2.9 凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)
3 結(jié)果與分析
    3.1 WT和XY10的藥敏試驗(yàn)
        3.1.1 目的菌株最小抑菌濃度(MIC)
    3.2 抗生素對(duì)WT和XY10生長(zhǎng)的影響
        3.2.1 CFU法
    3.3 回補(bǔ)lsrR以及過(guò)表達(dá)lsrR、mdtH
    3.4 過(guò)表達(dá)和回補(bǔ)菌株的藥敏試驗(yàn)
        3.4.1 過(guò)表達(dá)和回補(bǔ)菌株最小抑菌濃度(MIC)
    3.5 抗生素對(duì)過(guò)表達(dá)和回補(bǔ)菌株生長(zhǎng)的影響
        3.5.1 CFU法
    3.6 生長(zhǎng)曲線測(cè)定
    3.7 反轉(zhuǎn)錄實(shí)時(shí)熒光定量PCR(RT-qPCR)
        3.7.1 總RNA質(zhì)量鑒定
        3.7.2 RT-qPCR檢測(cè)目的菌株mdtH的轉(zhuǎn)錄水平
    3.8 LsrR蛋白對(duì)mdtH的調(diào)控機(jī)制
        3.8.1 克隆載體的構(gòu)建
        3.8.2 LsrR蛋白的提取與純化
        3.8.3 LsrR蛋白對(duì)mdtH的調(diào)控機(jī)制
4 討論
    4.1 APEC耐藥現(xiàn)狀
    4.2 基因lsrR與mdtH之間的聯(lián)系
    4.3 RT-qPCR對(duì)目的菌株mdtH轉(zhuǎn)錄水平的檢測(cè)
    4.4 LsrR蛋白對(duì)mdtH的調(diào)控機(jī)制
5 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
作者簡(jiǎn)介



本文編號(hào)：3759924