目的:本研究通過建立慢病毒介導(dǎo)的NCL基因沉默的胃癌細(xì)胞系,研究NCL沉默對胃癌細(xì)胞增殖能力的影響,為深入探究胃癌發(fā)生發(fā)展的分子機制提供理論基礎(chǔ)。方法:利用小發(fā)卡RNA(shRNA)介導(dǎo)的慢病毒系統(tǒng)沉默胃癌細(xì)胞中的NCL,并利用RT-q PCR和免疫印跡檢測基因沉默效果;并利用CCK-8實驗和平板克隆形成實驗檢測胃癌細(xì)胞的增殖能力的改變。結(jié)果:瓊脂糖凝膠電泳實驗檢測經(jīng)酶切鑒定的pKLO.1-NCL載體,顯示5000 bp和2000 bp兩條帶,測序峰圖顯示與設(shè)計序列一致;利用HEK293T包裝病毒,感染胃癌細(xì)胞SGC-7901,免疫印跡結(jié)果顯示sh NCL組NCL蛋白水平顯著低于對照組,RT-qPCR結(jié)果顯示,sh NCL組NCL表達(dá)量顯著降低,為對照組的0.4209±0.087倍(P<0.001);CCK-8實驗結(jié)果顯示,sh NCL組在第5天的吸光值較對照組顯著降低(P<0.001),平板克隆形成實驗結(jié)果顯示,sh NCL組克隆形成能力較對照組顯著降低,克隆形成數(shù)量顯著低于對照組(P<0.01)。結(jié)論:建立了慢病毒介導(dǎo)的NCL基因沉默的胃癌細(xì)胞系SGC-7901,...

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【文章目錄】：
前言
1 材料與方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        1.2.2 NCL基因沉默的病毒載體質(zhì)粒的構(gòu)建
        1.2.3 慢病毒的包裝
        1.2.4 慢病毒感染和穩(wěn)定細(xì)胞株篩選
        1.2.5 細(xì)胞RNA提取和q RT-PCR
        1.2.6 細(xì)胞樣品處理和免疫印跡
        1.2.7 CCK-8實驗檢測細(xì)胞增殖
        1.2.8 平板克隆形成實驗檢測細(xì)胞增殖
    1.3 統(tǒng)計學(xué)分析
2 結(jié)果
    2.1 NCL基因沉默的病毒質(zhì)粒的構(gòu)建
    2.2 NCL基因沉默的胃癌細(xì)胞系的建立
    2.3 NCL基因沉默對胃癌細(xì)胞SGC-7901增殖的影響
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