鴨源雞桿菌(Gallibacterium anatis,G.anatis)是巴氏桿菌科雞桿菌屬的革蘭氏陰性菌,主要感染雞、火雞、鴨、鵝等禽類。目前越來(lái)越多的研究證明,G.anatis作為一種條件性致病菌,不僅是構(gòu)成雞上呼吸道和下生殖道正常菌群的一部分,也可引起蛋雞輸卵管炎、腹膜炎等疾病,導(dǎo)致產(chǎn)蛋量下降、死亡率增加等。目前已經(jīng)確定了G.anatis的數(shù)種毒力因子,但其致病機(jī)制仍未被闡明。黏附是微生物定殖并侵襲黏膜組織的關(guān)鍵過(guò)程。G.anatis作為一種黏膜微生物,已經(jīng)被證實(shí)具有黏附塑料制品、形成生物被膜及產(chǎn)生一種糖蛋白樣血凝素等黏附相關(guān)功能,但在G.anatis定殖感染自然宿主的過(guò)程中發(fā)揮關(guān)鍵作用的具體因素還不清楚。在巴氏桿菌科的其他成員中,已經(jīng)報(bào)道了包括菌毛在內(nèi)的多種黏附素的存在,其中菌毛作為一種毛發(fā)樣、細(xì)長(zhǎng)的菌體表面附屬結(jié)構(gòu),是多種細(xì)菌的重要毒力因子。鑒于以上背景,本研究對(duì)鴨源雞桿菌中國(guó)分離株中F17樣菌毛主要類型Flf的分布與表達(dá)情況進(jìn)行了探究,并分析菌毛主要亞單位蛋白FlfA的免疫原性和反應(yīng)原性。同時(shí),通過(guò)鴨源雞桿菌對(duì)雞輸卵管原代上皮細(xì)胞的黏附和侵襲特性研究,篩選出致病力相對(duì)強(qiáng)的...

【文章頁(yè)數(shù)】：67 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
致謝
英文縮略表
摘要
文獻(xiàn)綜述
    1 鴨源雞桿菌概述
        1.1 鴨源雞桿菌的病原學(xué)特征
            1.1.1 主要形態(tài)特征
            1.1.2 主要培養(yǎng)特性
            1.1.3 主要生化特性
        1.2 鴨源雞桿菌的致病性
        1.3 鴨源雞桿菌的傳播途徑
        1.4 鴨源雞桿菌的毒力因子
            1.4.1 RTX樣毒素GtxA
            1.4.2 菌毛
            1.4.3 外膜囊泡
            1.4.4 莢膜
            1.4.5 金屬蛋白酶
            1.4.6 生物被膜
            1.4.7 血凝素
    2 巴氏桿菌科基因敲除技術(shù)的研究進(jìn)展
        2.1 自然轉(zhuǎn)化法
        2.2 接合轉(zhuǎn)移法
        2.3 Red重組技術(shù)
    3 小結(jié)
試驗(yàn)一 鴨源雞桿菌flfA基因的鑒定分析及原核表達(dá)
    1 材料與方法
        1.1 材料
            1.1.1 菌株和質(zhì)粒
            1.1.2 主要試劑
            1.1.3 主要儀器
        1.2 方法
            1.2.1 引物的設(shè)計(jì)與合成
            1.2.2 菌株的復(fù)蘇和細(xì)菌基因組的粗提
            1.2.3 G. anatis flfA基因的克隆及其序列分析
            1.2.4 Flf A蛋白B細(xì)胞抗原表位的預(yù)測(cè)
            1.2.5 原核表達(dá)載體pET-28a-flfA的構(gòu)建
            1.2.6 菌毛蛋白FlfA的表達(dá)和純化
            1.2.7 兔源抗血清的制備及重組蛋白的免疫印跡(Western Blotting)分析
            1.2.8 不同鴨源雞桿菌中FlfA蛋白表達(dá)情況的檢測(cè)
    2 結(jié)果
        2.1 18株G. anatis flfA基因的克隆及其序列分析結(jié)果
        2.2 6株G. anatis flfA基因推導(dǎo)的氨基酸序列同源性分析及其優(yōu)勢(shì)抗原表位的預(yù)測(cè)
        2.3 原核表達(dá)載體pET-28a-flfA的構(gòu)建
        2.4 SDS-PAGE檢測(cè)重組蛋白FlfA的表達(dá)
        2.5 重組蛋白及不同鴨源雞桿菌中FlfA蛋白表達(dá)情況的免疫印跡鑒定
    3 討論
試驗(yàn)二 鴨源雞桿菌對(duì)雞輸卵管原代上皮細(xì)胞黏附和侵襲能力的測(cè)定
    1 材料與方法
        1.1 材料
            1.1.1 菌株
            1.1.2 主要試劑
            1.1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        1.2 方法
            1.2.1 菌株復(fù)壯
            1.2.2 雞輸卵管原代上皮細(xì)胞的制備和培養(yǎng)
            1.2.3 鴨源雞桿菌Yu-PDS-Ru1SLG株對(duì)雞輸卵管原代上皮細(xì)胞侵襲的免疫組織化學(xué)檢測(cè)
            1.2.4 鴨源雞桿菌Yu-PDS-Ru1SLG株對(duì)雞輸卵管原代上皮細(xì)胞黏附的免疫組織化學(xué)檢測(cè)
            1.2.5 19株鴨源雞桿菌對(duì)雞輸卵管原代上皮細(xì)胞黏附能力的測(cè)定
    2 結(jié)果
        2.1 鴨源雞桿菌Yu-PDS-Ru1SLG株對(duì)雞輸卵管原代上皮細(xì)胞的侵襲情況
        2.2 鴨源雞桿菌Yu-PDS-Ru1SLG株對(duì)雞輸卵管原代上皮細(xì)胞的黏附動(dòng)態(tài)
        2.3 19株鴨源雞桿菌對(duì)雞輸卵管原代上皮細(xì)胞的黏附能力的測(cè)定結(jié)果
    3 討論
試驗(yàn)三 鴨源雞桿菌flf A基因缺失突變株的篩選
    1 材料與方法
        1.1 材料
            1.1.1 菌株
            1.1.2 本研究中使用的質(zhì)粒和部分載體的結(jié)構(gòu)示意圖
            1.1.3 主要試劑
            1.1.4 溶液配制
        1.2 方法
            1.2.1 引物的設(shè)計(jì)與合成
            1.2.2 Gmr抗性盒子及同源重組質(zhì)粒pBC-flfA-Gm^r的構(gòu)建
            1.2.3 同源重組質(zhì)粒pREΔflfA的構(gòu)建
            1.2.4 G. anatis自然感受態(tài)細(xì)胞的制備和突變株的篩選
            1.2.5 通過(guò)接合轉(zhuǎn)移法進(jìn)行突變株的篩選
    2 結(jié)果
        2.1 同源重組質(zhì)粒pBC-flfA-Gmr的構(gòu)建
        2.2 同源重組質(zhì)粒pREΔflfA的構(gòu)建
        2.3 自然轉(zhuǎn)化法篩選突變株的結(jié)果
        2.4 接合轉(zhuǎn)移法篩選突變株的結(jié)果
    3 討論
全文總結(jié)
參考文獻(xiàn)
附錄
ABSTRACT



本文編號(hào)：3757839