蘇云金芽胞桿菌(Bacillus thuringiensis,簡稱Bt)自從被發(fā)現(xiàn)至今已被廣泛的應(yīng)用于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)、森林保護、園林防治以及衛(wèi)生害蟲的防治。目前,越來越多的Bt制劑和Bt作物得到了廣泛的開發(fā)和應(yīng)用,在防治害蟲方面取得了良好的防治效果。自20世紀(jì)20年代以來,Bt蛋白就已經(jīng)用于農(nóng)業(yè)害蟲的防治,并取得了上佳的效果。因此,分離篩選高效、廣譜殺蟲活性的Bt菌株,克隆新的殺蟲活性基因,為生產(chǎn)實踐防病治蟲提供新的資源。本研究通過廣泛采取收集貴州地區(qū)土壤腐殖質(zhì),以此分離篩選了一批Bt菌株,并對其進行基因型鑒定、殺蟲活性分析,得到一批鱗翅目害蟲具有殺蟲活性的Bt菌株,并從CS137-2和CS72-1兩個菌株中克隆得到3個新的Bt基因。對貴州多個地區(qū)共收集1170份樣品進行芽胞桿菌抗生素分離處理,總共獲得976株芽胞桿菌,鑒定出181株Bt菌,平均分離率超過了18%。對得到這的一百多株Bt菌進行基因型分析,發(fā)現(xiàn)其中含cry1、cry2、cry4、cry8、cry9、cry20、cry22、cry28、cry30、cry31、cry37、cry40、cry46、cry52和cyt2共計15種基因...

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【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 文獻綜述
    1.1 蘇云金芽胞桿菌
    1.2 蘇云金芽胞桿菌的晶體蛋白
    1.3 Bt菌晶體蛋白結(jié)構(gòu)與功能作用
    1.4 蘇云金芽胞桿菌其它活性因子
        1.4.1 營養(yǎng)期殺蟲蛋白
        1.4.2 外毒素
        1.4.3 腸毒素
        1.4.4 幾丁質(zhì)酶
        1.4.5 雙效菌素
        1.4.6 Bt其它的毒力因子
    1.5 蘇云芽胞桿菌的開發(fā)應(yīng)用
    1.6 本研究的目的與意義
第二章 材料與方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 土樣采集
        2.1.2 菌株和質(zhì)粒
        2.1.3 培養(yǎng)基與抗生素
        2.1.4 主要實驗試劑
        2.1.5 主要儀器
        2.1.6 供試?yán)ハx
    2.2 實驗方法
        2.2.1 蘇云金芽胞桿菌的分離與晶體類型觀察
        2.2.2 Bt菌SEM觀察
        2.2.3 蘇云金芽胞桿菌基因組的提取
        2.2.4 蘇云金芽胞桿菌晶體蛋白的提取
        2.2.5 菌株晶體蛋白濃度測定與SDS-PAGE檢測
        2.2.6 HD73-感受態(tài)細(xì)胞的制備
        2.2.7 質(zhì)粒轉(zhuǎn)化
        2.2.8 陽性轉(zhuǎn)化子的篩選與鑒定
        2.2.9 質(zhì)粒去甲基化
        2.2.10 PCR擴增操作
        2.2.11 酶切和連接體系
        2.2.12 PCR擴增產(chǎn)物的回收和連接
        2.2.13 質(zhì)粒提取及穿梭表達(dá)載體的構(gòu)建
        2.2.14 蘇云金芽胞桿菌基因的鑒定
        2.2.15 PCR-RFLP分析
        2.2.16 菌株室內(nèi)生物活性分析
        2.2.17 基因組測序以及組裝
第三章 結(jié)果與分析
    3.1 菌株分離結(jié)果
        3.1.1 菌株的分離
        3.1.2 伴胞晶體形態(tài)的多樣性
        3.1.3 基因型鑒定
        3.1.4 Bt菌株蛋白檢測分析
        3.1.5 Bt菌株對棉鈴蟲的生物活性研究
        3.1.6 蘇云金芽胞桿菌CS72-2和CS137-2的菌株特征
        3.1.7 菌株CS72-2和CS137-2蛋白表達(dá)的SDS-PAGE電泳分析
        3.1.8 Bt菌株CS72-2和CS137-2生物活性測定
    3.2 2株Bt菌株殺蟲基因的挖掘
    3.3 菌株CS72-2和CS137-2中基因的克隆、表達(dá)研究
        3.3.1 新基因的全長擴增與克隆
        3.3.2 基因序列分析
        3.3.4 cry28-like基因的克隆與蛋白表達(dá)
        3.3.5 cry37-like和cyt2-like克隆與蛋白表達(dá)
第四章 結(jié)論與討論
參考文獻
致謝
作者簡歷



本文編號：3748295