溫度是決定作物品質(zhì)和產(chǎn)量的重要環(huán)境因素,我國每年由于冷害都會造成嚴(yán)重的經(jīng)濟損失。油菜是我國主要的經(jīng)濟及油料作物,了解其抗冷機制并通過基因工程手段提高其抗凍能力對于增加油菜產(chǎn)量和改善油菜品質(zhì)意義重大。ICE基因?qū)儆赽HLH家族,在植物冷信號應(yīng)答中起重要作用。本論文以擬南芥AtICE1和AtICE2基因序列作為檢索序列,在油菜數(shù)據(jù)庫中通過同源序列比對,以油菜“天油8號”為材料克隆出ICE基因在油菜中的同源基因BrICE1和BrICE2,通過轉(zhuǎn)基因(GM)擬南芥對它們的功能進行了研究,主要結(jié)果如下:1.克隆到的油菜BrICE1和BrICE2基因含有擬南芥ICE的典型功能結(jié)構(gòu)域和保守基序;RT-PCR鑒定的結(jié)果表明油菜ICE基因在GM擬南芥中穩(wěn)定表達(dá)。2.在冷脅迫下,AtICE1、AtICE2、BrICE1和BrICE2的GM擬南芥存活率較野生型更高,表明GM植物的抗冷性強于野生型。3.煙草瞬轉(zhuǎn)的結(jié)果表明,AtICE1、AtICE2、BrICE1和BrICE2均定位于細(xì)胞核中;GUS染色結(jié)果顯示,它們在植物葉片、下胚軸以及根部都有表達(dá),且在下胚軸和葉片中的表達(dá)強于根部的表達(dá)。4.冷脅迫時GM擬...

【文章頁數(shù)】：65 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第1章 引言
    1.1 冷信號對植物的影響
        1.1.1 冷脅迫下植物形態(tài)特征的變化
        1.1.2 冷脅迫下植物膜系統(tǒng)的變化
        1.1.3 冷脅迫對植物光合作用的影響
        1.1.4 冷脅迫對ROS及其清除系統(tǒng)的影響
        1.1.5 植物中滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)在冷脅迫下的變化
    1.2 冷響應(yīng)調(diào)控基因的研究
        1.2.1 ICE激活因子
        1.2.2 CBF類轉(zhuǎn)錄因子
        1.2.3 COR基因與植物的抗冷性
        1.2.4 ICE基因參與的冷信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路
    1.3 作物中抗寒基因的研究
        1.3.1 油菜中抗寒基因的研究現(xiàn)狀
        1.3.2 ICE基因的研究現(xiàn)狀
    1.4 立題依據(jù)和研究內(nèi)容
        1.4.1 立題依據(jù)
        1.4.2 研究內(nèi)容
第2章 材料與方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 菌株和質(zhì)粒
    2.2 實驗主要設(shè)備
        2.2.1 實驗主要設(shè)備
    2.3 實驗方法
        2.3.1 植物材料的培養(yǎng)
        2.3.2 載體的構(gòu)建和遺傳轉(zhuǎn)化
        2.3.3 轉(zhuǎn)基因材料的鑒定和處理
        2.3.4 GUS活性染色組織分析
        2.3.5 生理指標(biāo)的測定及方法
    2.4 數(shù)據(jù)處理與分析方法
第3章 實驗結(jié)果
    3.1 目的基因的序列分析與克隆
    3.2 BrICE1和BrICE2的GM擬南芥抗寒性表型分析
    3.3 瞬時表達(dá)觀察BrICE1和BrICE2 的亞細(xì)胞定位
    3.4 油菜ICE基因的表達(dá)模式分析
    3.5 冷脅迫對GM擬南芥ROS含量的影響
    3.6 冷脅迫下GM擬南芥中抗氧化酶含量分析
    3.7 冷脅迫下GM擬南芥相對電導(dǎo)率和丙二醛含量的分析
    3.8 冷脅迫下GM擬南芥葉綠素含量的變化
    3.9 冷脅迫下GM擬南芥中可溶性糖及脯氨酸含量的變化
    3.10 冷脅迫下冷應(yīng)激基因的表達(dá)分析
第4章 討論與結(jié)論
    4.1 討論與分析
    4.2 問題與展望
    4.3 主要結(jié)論
參考文獻
致謝



本文編號：3746768