目的:基于“五味合化”理論,采用全基因芯片技術(shù)探索人參烏梅湯加味(酸甘化陰法)對腹瀉模型大鼠結(jié)腸差異基因的分子調(diào)控機制。方法:84只幼齡SD大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)2d后,隨機抽取12只為空白組(A組),予以生理鹽水灌胃(30ml/kg,1次/d)。剩余72只為造模組,參考文獻方法,采用苦寒瀉下、勞倦力竭復(fù)合方法制作腹瀉模型。予以25%番瀉葉灌胃(20ml/kg,1次/d);灌胃30min后,大鼠入水游泳(水深40cm,水溫30℃,尾部負重約其體重5%鉛絲),至力竭(大鼠鼻尖沒水5s)后撈出烘干;連續(xù)造模21d。參考文獻方法評定造模成功后,隨機分為模型組(B組)、西藥組(D組)、全方組(人參烏梅湯加味全方,E組)、去甘味藥組(人參烏梅湯加味去甘味藥,F組)、去酸味藥組(人參烏梅湯加味去酸味藥,G組)、去辛味藥組(人參烏梅湯加味去辛味藥,H組),每組12只;分別予以生理鹽水(30ml/kg,1次/d)、5%媽咪愛(0.7g/kg,1次/d)、人參烏梅湯加味全方、人參烏梅湯加味去甘味藥、人參烏梅湯加味去酸味藥、人參烏梅湯加味去辛味藥(各中藥組用法均為35g/kg,1次/d)灌胃,連續(xù)干預(yù)7d。觀察造...

【文章頁數(shù)】：178 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
ABSTRACT
中英文對照縮略詞表
引言
第一部分 文獻研究
    1 中藥藥性理論的認識及研究進展
        1.1 中藥藥性理論的內(nèi)涵
        1.2 “五味合化”的性味配伍理論
        1.3 酸甘化陰法的研究價值
    2 小兒腹瀉病的中西醫(yī)認識及研究進展
        2.1 祖國醫(yī)學(xué)對小兒腹瀉病的認識及研究進展
        2.2 西醫(yī)對小兒腹瀉病的認識及研究進展
    3 人參烏梅湯的認識及研究進展
        3.1 人參烏梅湯的歷史淵源
        3.2 人參烏梅湯的臨床實踐
        3.3 人參烏梅湯的實驗研究
    4 現(xiàn)代生物分子技術(shù)在中藥復(fù)方的研究應(yīng)用
第二部分 實驗研究
    實驗一 人參烏梅湯加味及其性味拆方作用腹瀉模型大鼠結(jié)腸病理形態(tài)學(xué)觀察實驗
        1 材料與儀器
            1.1 實驗動物
            1.2 實驗用藥
            1.3 主要試劑與儀器
        2 實驗方法
            2.1 分組
            2.2 藥物制備
            2.3 模型制備
        3 結(jié)果
            3.1 一般情況觀察
            3.2 結(jié)腸病理形態(tài)學(xué)觀察
        4 小結(jié)
    實驗二 人參烏梅湯加味及其性味拆方干預(yù)的腹瀉模型大鼠結(jié)腸全基因芯片實驗
        1 材料與儀器
            1.1 實驗動物
            1.2 實驗用藥
            1.3 主要儀器
            1.4 主要試劑
        2 方法
            2.1 分組
            2.2 藥物及模型制備
            2.3 實驗取材
            2.4差異基因篩選實驗
            2.5 統(tǒng)計分析
            2.6 芯片質(zhì)控
        3 結(jié)果
            3.1 總RNA質(zhì)檢結(jié)果
            3.2 芯片實驗結(jié)果質(zhì)控
            3.3 芯片熒光信號掃描圖片結(jié)果
            3.4 芯片數(shù)據(jù)結(jié)果質(zhì)量評價
            3.5 差異基因篩選結(jié)果
        4 小結(jié)
    實驗三 人參烏梅湯加味及其拆方干預(yù)的腹瀉大鼠結(jié)腸差異表達基因生物信息學(xué)分析
        1 實驗方法
        2 實驗步驟
        3 結(jié)果
            3.1 差異基因GO功能富集分析結(jié)果
            3.2 差異基因KEGG pathway富集分析結(jié)果
        4 小結(jié)
    實驗四 人參烏梅湯加味及其拆方干預(yù)的腹瀉模型大鼠結(jié)腸基因芯片實驗結(jié)果實時熒光PCR驗證實驗
        1 實驗用品
            1.1 實驗樣品
            1.2 Real-time PCR驗證差異基因篩選
            1.3 主要儀器
            1.4 主要試劑
            1.5 引物
        2 實驗方法
            2.1 RNA抽提
            2.2 RNA質(zhì)檢
            2.3 反轉(zhuǎn)錄
            2.4 SYBR Green qPCR
            2.5 統(tǒng)計方法
        3 結(jié)果
            3.1 RNA質(zhì)檢結(jié)果
            3.2 RT-PCR驗證結(jié)果
            3.3 驗證基因生物信息學(xué)分析結(jié)果
        4 小結(jié)
第三部分 討論
    1 腹瀉動物模型的制備
        1.1 腹瀉模型動物選擇
        1.2 腹瀉疾病模型制備的常用藥物及方法
        1.3 腹瀉病證結(jié)合動物模型制備方法
        1.4 課題組前期動物腹瀉模型研究
    2 人參烏梅湯加味組方理論
        2.1 人參烏梅湯加味立論及方解
        2.2 人參烏梅湯加味的效應(yīng)評價
        2.3 人參烏梅湯加味的現(xiàn)代機制研究
    3 人參烏梅湯加味對幼齡腹瀉大鼠結(jié)腸差異基因表達的調(diào)控機制
        3.1 基因芯片技術(shù)在腹瀉病的應(yīng)用
        3.2 全基因芯片實驗結(jié)果討論
        3.3 芯片實驗RT-PCR驗證結(jié)果討論
第四部分 結(jié)論
創(chuàng)新性
問題與展望
致謝
參考文獻
附件
    附件1:綜述
        參考文獻
    附件2:全基因?qū)嶒灍晒庑酒瑨呙鑸D
    附件3:在讀期間公開發(fā)表的學(xué)術(shù)論文、專著及科研成果



本文編號：3746435