目的研究慢病毒介導(dǎo)核心結(jié)合因子α1(cbfα1)基因感染對人牙齦成纖維細胞(hGFs)成骨特性的影響。方法構(gòu)建攜帶目的基因的慢病毒表達載體pLenti6.3-cbfα1-Ires-EGFP (pL-cbfα1)(實驗組),通過酶切、測序驗證其構(gòu)建成功,利用293T細胞包裝病毒,并測定病毒濃度,將病毒液感染hGFs,pLenti6.3-Ires-EGFP (pL-E)為空載體組,未被感染的正常hGFs為空白對照組,通過熒光實時定量PCR檢測cbfα1的mRNA的表達,通過細胞免疫化學(xué)染色檢測cbfα1蛋白的表達;通過熒光實時定量PCR檢測各組成骨相關(guān)基因骨涎蛋白(Bsp)、骨橋蛋白(Opn)、Ⅰ型膠原(ColⅠ)、骨鈣蛋白(OC)的表達。結(jié)果慢病毒表達載體能夠成功感染人牙齦成纖維細胞,并檢測到cbfα1基因mRNA、蛋白的表達;實驗組中,BSP、OPN、ColⅠ、OC的表達明顯高于對照組和空載體組(P<0.05)。結(jié)論外源性基因cbfα1能夠在人牙齦成纖維細胞中表達,并促進其向成骨細胞方向轉(zhuǎn)化,為進一步研究該基因及種子細胞在牙周組織再生工程中的作用奠定了基礎(chǔ)。

【文章頁數(shù)】：6 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 主要試劑和儀器
    1.2 方法
        1.2.1 重組慢病毒構(gòu)建及包裝
        1.2.2 細胞培養(yǎng)
        1.2.3 慢病毒感染hGFs
        1.2.4 hGFs外源基因cbfα1 mRNA表達
        1.2.4 細胞免疫組化
        1.2.5 hGFs骨相關(guān)基因的表達
    1.3 統(tǒng)計學(xué)方法
2 結(jié) 果
    2.1 慢病毒構(gòu)建及包裝
    2.2 重組慢病毒感染hGFs
    2.3 外源基因cbfα1 mRNA表達
    2.4 細胞免疫染色
    2.5 成骨相關(guān)基因的表達
3 討 論



本文編號：3744976