自噬(autophagy)是細(xì)胞內(nèi)重要的生理過程,其主要通過溶酶體降解細(xì)胞內(nèi)長壽蛋白和生理或病理原因引起的衰老或損壞的細(xì)胞器,從而維持細(xì)胞內(nèi)的穩(wěn)態(tài)。SNARE蛋白家族成員Syntaxin17(Syx17)一個自噬相關(guān)的蛋白,它通過與Usnp(SNAP-29)Vamp7形成復(fù)合物觸發(fā)自噬體與溶酶體融合進(jìn)而促進(jìn)自噬過程。我們實(shí)驗(yàn)室此前的研究顯示Syx17基因突變后會引起果蠅三齡幼蟲神經(jīng)肌肉接頭(neuromuscular junction,NMJ)的發(fā)育異常,但是果蠅中Syx17表達(dá)的組織定位及其相應(yīng)的功能尚不十分清楚。本課題用CRISPR/Cas9技術(shù)及同源重組技術(shù)將Syx17的閱讀編碼框替換為Gal4,獲得Syx17-Gal4品系。經(jīng)鑒定Syx17-Gal4既可以作為敲除突變品系分析突變體表型,也可以通過驅(qū)動熒光蛋白(如GFP)從而觀察內(nèi)源性Syx17的表達(dá)定位。結(jié)果顯示Syx17廣泛分布于中樞神經(jīng)系統(tǒng)(central nervous system,CNS)以及突觸前神經(jīng)肌肉接頭中;Syx17-Gal4也顯示NMJ的Bouton異常。值得注意的是,我們發(fā)現(xiàn)Syx17高表達(dá)于果蠅大腦蘑菇...

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【學(xué)位級別】：碩士

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中文摘要
Abstract
主要縮略詞表
前言
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 SNARE蛋白的研究進(jìn)展
        1.1.1 SNARE蛋白的發(fā)現(xiàn)
        1.1.2 SNARE蛋白的結(jié)構(gòu)
        1.1.3 SNARE假說
        1.1.4 SNARE蛋白與疾病
    1.2 Syntaxin17 概述
    1.3 自噬的研究進(jìn)展
        1.3.1 自噬的分子機(jī)制
        1.3.2 自噬與疾病
    1.4 活性氧簇(ROS)產(chǎn)生的來源與危害
    1.5 展望
第二章 實(shí)驗(yàn)材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 儀器
        2.1.2 試劑
        2.1.3 果蠅的品系
        2.1.4 果蠅的飼養(yǎng)
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 PCR割膠回收測序鑒定Syx17 knock in Gal4
        2.2.2 果蠅基因組DNA的提取
        2.2.3 免疫熒光染色
        2.2.4 果蠅睡眠行為分析
        2.2.5 果蠅的嗅覺學(xué)習(xí)記憶能力檢測
第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
    3.1 Syx17的結(jié)構(gòu)和功能
    3.2 CRISPR/Cas9 制備Syx17 knock in Gal4 果蠅的設(shè)計(jì)和鑒定
        3.2.1 PCR鑒定
        3.2.2 Western blot檢測
    3.3 Syx17主要表達(dá)在突觸前神經(jīng)肌肉接頭和中樞神經(jīng)系統(tǒng)
        3.3.1 Syx17 在果蠅突觸前神經(jīng)肌肉接頭(NMJ)處表達(dá)
        3.3.2 Syx17在果蠅中樞神經(jīng)系統(tǒng)中表達(dá)
    3.4 在蘑菇體中敲減Syx17后引起蘑菇體處自噬小體的累積
    3.5 在蘑菇體中敲減Syx17對嗅覺學(xué)習(xí)記憶和睡眠節(jié)律未見明顯影響
    3.6 果蠅Syx17 影響活性氧(ROS)水平
    3.7 果蠅Syx17突變體中ROS水平異常的原因
第四章 討論
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡介



本文編號：3743562