MYB轉(zhuǎn)錄因子家族是植物中功能多樣且數(shù)目龐大的家族之一,其在植物的抗逆、發(fā)育及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過(guò)程中發(fā)揮重要作用。前期研究發(fā)現(xiàn)MYB122基因受鹽脅迫誘導(dǎo)表達(dá),本研究對(duì)PsnMYB122基因的耐鹽功能進(jìn)行分析。結(jié)果如下:通過(guò)PlantTFDB在線網(wǎng)站獲取了毛果楊MYB122基因的CDS序列,設(shè)計(jì)特異性引物,從小黑楊中克隆出951bp的PsnMYB122基因CDS序列,通過(guò)生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn)該基因編碼的蛋白質(zhì)包含317個(gè)氨基酸,分子量為36.4 kDa,為親水蛋白。RT-qPCR分析表明,PsnMYB122基因表達(dá)具有組織特異性,并受鹽脅迫誘導(dǎo)表達(dá)。在150 mM NaCl脅迫條件下,該基因在根中的表達(dá)水平明顯比在葉和莖中表達(dá)水平高,并在脅迫12h表達(dá)量達(dá)到最高。將PsnMYB122基因構(gòu)建于pBI121-GFP載體進(jìn)行亞細(xì)胞定位,發(fā)現(xiàn)PsnMYB122蛋白定位在細(xì)胞核中。構(gòu)建pGBKT7-PsnMYB122載體進(jìn)行酵母雙雜交實(shí)驗(yàn),發(fā)現(xiàn)PsnMYB122具有轉(zhuǎn)錄自激活活性,其轉(zhuǎn)錄激活域位于C端1-60aa之間。構(gòu)建pGADT7-Rec-PsnMYB 122載體與pAbAi-target prom...

【文章頁(yè)數(shù)】：61 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 緒論
    1.1 引言
    1.2 抗逆相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子
        1.2.1 鹽脅迫相關(guān)NAC類(lèi)轉(zhuǎn)錄因子的研究進(jìn)展
        1.2.2 鹽脅迫相關(guān)WRKY類(lèi)轉(zhuǎn)錄因子的研究進(jìn)展
        1.2.3 鹽脅迫相關(guān)AP2/ERF類(lèi)轉(zhuǎn)錄因子的研究進(jìn)展
    1.3 MYB轉(zhuǎn)錄因子研究進(jìn)展
        1.3.1 MYB轉(zhuǎn)錄因子結(jié)構(gòu)特征研究進(jìn)展
        1.3.2 MYB轉(zhuǎn)錄因子的生物學(xué)功能研究進(jìn)展
        1.3.3 MYB轉(zhuǎn)錄因子的抗逆功能研究進(jìn)展
    1.4 研究目的及意義
2 小黑楊MYB122基因克隆及分析
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 植物材料與生長(zhǎng)環(huán)境
        2.1.2 載體與菌種
        2.1.3 主要試劑
        2.1.4 培養(yǎng)基配制
        2.1.5 實(shí)驗(yàn)儀器
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 小黑楊RNA的提取與反轉(zhuǎn)錄
        2.2.2 小黑楊PsnMYB122基因的克隆與pMD19-T-PsnMYB122的構(gòu)建
        2.2.3 小黑楊PsnMYB122基因的生物信息學(xué)分析
        2.2.4 pBI121-GFP-PsnMYB122融合表達(dá)載體的構(gòu)建
        2.2.5 基因槍瞬時(shí)轉(zhuǎn)化
        2.2.6 小黑楊PsnMYB122基因的時(shí)空表達(dá)分析
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 MYB122轉(zhuǎn)錄因子基因的生物信息學(xué)分析
        2.3.2 Pbi121-MYB122-GFP融合表達(dá)載體的構(gòu)建
        2.3.3 PsnMYB122基因的時(shí)空表達(dá)分析
    2.4 本章小結(jié)
3 PsnMYB122基因的表達(dá)及抗鹽功能分析
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 植物材料及生長(zhǎng)條件
        3.1.2 實(shí)驗(yàn)菌種
        3.1.3 主要試劑
        3.1.4 培養(yǎng)基配制
        3.1.5 實(shí)驗(yàn)儀器
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 植物過(guò)表達(dá)載體pBI121-PsnMYB122的構(gòu)建
        3.2.2 pBI121-PsnMYB122穩(wěn)定轉(zhuǎn)基因煙草的獲取
        3.2.3 轉(zhuǎn)基因煙草的生理指標(biāo)測(cè)定
        3.2.4 轉(zhuǎn)基因煙草組織化學(xué)染色分析
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 植物過(guò)表達(dá)載體pBI121-PsnMYB122的構(gòu)建
        3.3.2 轉(zhuǎn)基因煙草的篩選及鑒定
        3.3.3 轉(zhuǎn)基因煙草的耐鹽性分析
        3.3.4 轉(zhuǎn)基因煙草的生理指標(biāo)測(cè)定
        3.3.5 轉(zhuǎn)基因煙草組織化學(xué)染色
    3.4 本章小結(jié)
4 PsnMYB122轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域研究
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.1.1 實(shí)驗(yàn)菌種
        4.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        4.1.3 藥品及培養(yǎng)基制備
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 pGBKT7-PsnMYB122載體構(gòu)建
        4.2.2 pGBKT7-PsnMYB122的轉(zhuǎn)錄自激活結(jié)構(gòu)域研究
        4.2.3 pGBKT7-PsnMYB122的轉(zhuǎn)錄自激活檢測(cè)
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 pGBKT7-PsnMYB122載體構(gòu)建
        4.3.2 pGBKT7-PsnMYB122轉(zhuǎn)錄激活活性檢測(cè)
        4.3.3 PsnMYB122轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域研究
    4.4 本章小結(jié)
5 PsnMYB122與已知作用元件互作驗(yàn)證
    5.1 實(shí)驗(yàn)材料
        5.1.1 菌株與載體
        5.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        5.1.3 藥品及培養(yǎng)基制備
    5.2 實(shí)驗(yàn)方法
        5.2.1 pGADT7-Rec-PsnMYB122載體構(gòu)建
        5.2.2 已知元件的查找
        5.2.3 pAbAi-target promoter誘餌載體構(gòu)建
        5.2.4 PsnMYB122與已知元件互作驗(yàn)證
    5.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        5.3.1 pGADT7-Rec-PsnMYB122載體的構(gòu)建
        5.3.2 酵母單雜交實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析
    5.4 本章小結(jié)
討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號(hào)：3743608