玉米根螢葉甲Diabrotica virgiferavirgifera LeConte是一種世界性的重要玉米害蟲,2007年被我國列入進境植物檢疫性有害生物名錄。隨著玉米根螢葉甲抗藥性的產(chǎn)生,尋找新的殺蟲劑靶標(biāo)位點成為防治玉米根螢葉甲的手段之一。研究玉米根螢葉甲圍食膜,對于開發(fā)針對圍食膜的殺蟲劑進行害蟲防治具有重要意義。目前玉米根螢葉甲的圍食膜相關(guān)基因鮮有研究報道。本文成功克隆并分析了 7個玉米根螢葉甲圍食膜相關(guān)基因的功能,對于尋找新的殺蟲劑靶標(biāo)位點和制定新的IPM策略具有重要的理論和實踐意義。DvvCHS2是玉米根螢葉甲中腸幾丁質(zhì)合成酶2,參與中腸圍食膜的幾丁質(zhì)合成。通過RACE-PCR,得到了 DvvCHS2的cDNA全長。實時熒光定量PCR（RT-qPCR）分析發(fā)現(xiàn),DvvCHS2在玉米根螢葉甲3齡幼蟲和成蟲時期表達量最高,且主要在中腸細胞中表達。dsCHS2對DvvCHS2的沉默效率很高,最高沉默效率可達90%。在取食dsCHS2后1天,成蟲DvvCHS2表達量就會顯著降低。成蟲在取食dsCHS2后的6天內(nèi),生長正常,沒有出現(xiàn)拒食和死亡。DvvCHS2基因沉默也沒有導(dǎo)致成蟲的毒... 

【文章頁數(shù)】：119 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
第一章 文獻綜述
    1 玉米根螢葉甲
        1.1 玉米根螢葉甲的形態(tài)特征
        1.2 玉米根螢葉甲的生活史
        1.3 玉米根螢葉甲的危害
        1.4 玉米根螢葉甲的防治
        1.5 玉米根螢葉甲傳入我國的風(fēng)險預(yù)測
    2 圍食膜
        2.1 圍食膜的功能
        2.2 圍食膜的組成
    3 RNAi
        3.1 昆蟲RNAi效率的研究
        3.2 RNAi在IPM上的應(yīng)用
    4 本論文的研究目的及意義
第二章 玉米根螢葉甲幾丁質(zhì)合成酶Ⅱ基因DvvCHS2的分子特性及表達量分析
    1 材料與方法
        1.1 供試蟲源及飼養(yǎng)
        1.2 試劑(詳見附錄Ⅰ)
        1.3 玉米根螢葉甲成蟲人工飼料制作
        1.4 主要儀器
        1.5 引物設(shè)計
        1.6 總RNA的提取與cDNA第一鏈合成
        1.7 PCR擴增、產(chǎn)物回收純化、連接及轉(zhuǎn)化
        1.8 克隆PCR和質(zhì)粒提取
        1.9 不同發(fā)育時期、不同組織DvvCHS2表達量測定(熒光定量PCR)
    2 結(jié)果與分析
        2.1 玉米根螢葉甲成蟲中腸形態(tài)
        2.2 玉米根螢葉甲DvvCHS2的cDNA序列及推導(dǎo)的蛋白序列
        2.3 幾種昆蟲CHS2的氨基酸序列對比
        2.4 昆蟲CHS2的系統(tǒng)進化樹分析
        2.5 不同組織DvvCHS2的表達量
        2.6 不同發(fā)育時期DvvCHS2的表達量
    3 討論
第三章 玉米根螢葉甲幾丁質(zhì)合成酶Ⅱ基因DvvCHS2的功能分析
    1 材料與方法
        1.1 供試蟲源及飼養(yǎng)
        1.2 試劑(詳見附錄Ⅰ)
        1.3 玉米根螢葉甲成蟲人工飼料制作
        1.4 主要儀器
        1.5 T7啟動子引物設(shè)計
        1.6 總RNA的提取與cDNA第一鏈合成
        1.7 含有dsRNA模板DNA序列的質(zhì)粒的合成
        1.8 dsRNA的合成
        1.9 dsRNA沉默效率實驗設(shè)計
        1.10 生物測定
        1.11 DvvCHS2對藥劑敏感度影響的實驗
    2 結(jié)果與分析
        2.1 dsRNA的合成
        2.2 dsCHS2的沉默效率
        2.3 玉米根螢葉甲成蟲對西維因和毒死蜱的敏感性
        2.4 沉默DvvCHS2后玉米根螢葉甲成蟲對毒死蜱和西維因的敏感度變化
    3 討論
第四章 玉米根螢葉甲中腸幾丁質(zhì)酶基因DvvMgCHT的分子特性及表達量分析
    1 材料與方法
        1.1 供試蟲源及飼養(yǎng)
        1.2 試劑(附錄Ⅰ)
        1.3 玉米根螢葉甲成蟲人工飼料制作
        1.4 主要儀器
        1.5 引物設(shè)計
        1.6 總RNA的提取與cDNA第一鏈合成
        1.7 PCR擴增、產(chǎn)物回收純化、連接及轉(zhuǎn)化
        1.8 克隆PCR和質(zhì)粒提取
        1.9 不同發(fā)育時期、不同組織DvvMgCHT表達量測定(熒光定量PCR)
    2 結(jié)果與分析
        2.1 玉米根螢葉甲DvvMgCHT的cDNA序列及推導(dǎo)的蛋白序列
        2.2 幾種昆蟲CHT的氨基酸序列對比
        2.3 昆蟲CHT的系統(tǒng)進化樹分析
        2.4 不同組織DvvMgCHT的表達量
        2.5 不同發(fā)育時期DvvMgCHT的表達量
    3 討論
第五章 玉米根螢葉甲中腸幾丁質(zhì)酶基因DvvMgCHT的功能分析
    1 材料與方法
        1.1 供試蟲源及飼養(yǎng)
        1.2 試劑(附錄Ⅰ)
        1.3 玉米根螢葉甲成蟲人工飼料制作
        1.4 主要儀器
        1.5 T7啟動子引物設(shè)計
        1.6 總RNA的提取與cDNA第一鏈合成
        1.7 含有dsRNA模板DNA序列的質(zhì)粒的合成
        1.8 dsRNA的合成
        1.9 dsRNA沉默效率實驗設(shè)計
        1.10 DvvMgCHT對藥劑敏感度影響的實驗
    2 結(jié)果與分析
        2.1 dsMgCHT的沉默效率
        2.2 沉默DvvMgCHT后玉米根螢葉甲成蟲對毒死蜱和西維因的敏感度變化
    3 討論
第六章 玉米根螢葉甲圍食膜因子基因DvvPMPs的分子特性及表達量分析
    1 材料與方法
        1.1 供試蟲源及飼養(yǎng)
        1.2 試劑(附錄Ⅰ)
        1.3 玉米根螢葉甲成蟲人工飼料制作
        1.4 主要儀器
        1.5 引物設(shè)計
        1.6 總RNA的提取與cDNA第一鏈合成
        1.7 PCR擴增、產(chǎn)物回收純化、連接及轉(zhuǎn)化
        1.8 克隆PCR和質(zhì)粒提取
        1.9 不同發(fā)育時期、不同組織DvvPMPs表達量測定(熒光定量PCR)
    2 結(jié)果與分析
        2.1 玉米根螢葉甲DvvPMs的cDNA序列及推導(dǎo)的蛋白序列
        2.2 玉米根螢葉甲PMPs的氨基酸序列對比
        2.3 昆蟲PMP的系統(tǒng)進化樹分析
        2.4 不同組織DvvPMPs的表達量
        2.5 不同發(fā)育時期DvvPMPs的表達量
    3 討論
第七章 玉米根螢葉甲圍食膜因子基因DvvPMPs的功能分析
    1 材料與方法
        1.1 供試蟲源及飼養(yǎng)
        1.2 試劑(附錄Ⅰ)
        1.3 玉米根螢葉甲成蟲人工飼料制作
        1.4 主要儀器
        1.5 T7啟動子引物設(shè)計
        1.6 總RNA的提取與cDNA第一鏈合成
        1.7 含有dsRNA模板DNA序列的質(zhì)粒的合成
        1.8 dsRNA的合成
        1.9 dsRNA沉默效率實驗設(shè)計
        1.10 DvvPMPs對藥劑敏感度影響的實驗
    2 結(jié)果與分析
        2.1 dsPMPs的沉默效率
        2.2 沉默DvvPMPs后玉米根螢葉甲成蟲對毒死蜱和西維因的敏感度變化
    3 討論
全文總結(jié)與展望
    1 總結(jié)
    2 本研究創(chuàng)新之處
    3 問題與展望
參考文獻
致謝
附錄Ⅰ 本論文所用試劑、試劑盒列表
附錄Ⅱ 本論文熒光定量和dsRNA合成所用的引物
附錄Ⅲ 本論文克隆的所有基因序列
作者簡介


【參考文獻】：
期刊論文
[1]玉米根螢葉甲的抗逆性與防治研究進展[J]. 陳宏,Blair D.Siegfried,陳乃中,王音.  植物保護. 2009(06)
[2]玉米根螢葉甲在中國的潛在適生區(qū)域與檢疫措施研究[J]. 張俊華,馬菲,曹逸霞,黃習(xí)軍,陳宏,陳乃中.  植物檢疫. 2009(06)
[3]圍食膜因子的分子結(jié)構(gòu)及其功能[J]. 蔡秋月.  廣西輕工業(yè). 2007(06)
[4]警惕危險性害蟲——玉米根螢葉甲傳入我國[J]. 張麗杰,楊星科.  昆蟲知識. 2002(02)



本文編號：3733387